桂花查爾酮異構酶基因OfCHI的克隆與表達分析.pdf

1、桂花(Osmanthus fragrans Lour.)是一種四季常青的小型樹種，是我國本有的樹種，具有悠久的歷史。如今，我國對于桂花的研究非常廣泛和深入，也取得了舉世矚目的成果。2004年，我國被授予“桂花品種國際登錄權威”，此為我國的第二個此類權威。桂花品種豐富，其品種可根據花色的不同進行歸類及區(qū)分。其顏色由淺到深主要是從乳白色到橙紅色。桂花的花色是其品種分類的一項主要依據，對于桂花花色的研究在其分類及品種鑒定上有重大的意義。還能為

2、桂花新品種的培育和繁殖奠定理論基礎，推動桂花新品種的繁育，促進桂花產業(yè)的發(fā)展。
　　桂花中的色素主要是類黃酮，花青苷是類黃酮中的一種，它是花色形成的主要物質。目前，有關桂花花色方面的報道相對較少，對桂花中花青苷的研究更為少見。為探究花青苷含量對桂花花色的影響，花青苷合成相關酶CHI基因在花青苷合成途徑中的作用以及CHI基因在桂花不同組織中的表達情況，本研究以‘橙紅丹桂’、‘金桂’、‘早銀桂’3個桂花品種為試驗材料，測定了3個品種桂

3、花的花青苷含量，同時，利用RACE技術克隆了CHI基因Of CHI的cDNA全長，并且利用RT-PCR技術分析了CHI基因在3種桂花中及在不同組織中的表達特性。試驗獲得的主要結果如下:
　　(1)以‘金桂’花瓣cDNA為模板，利用RACE技術克隆了桂花中CHI基因的序列。CHI基因序列全長為1069bp，5’非編碼區(qū)96bp，3’非編碼區(qū)226bp和開放閱讀框747bp，編碼一個含有249個氨基酸的蛋白質。將其命名為OfCHI，G

4、eneBank登錄號為KR815815。氨基酸序列上存激活位點:Arg-38，Gly-39，Leu-40,Phe-49,Thr-50,Tyr-108,Lys-111,Val-112,Asn-115,and Cys-116。
　　(2)運用qRT-PCR的方法對OfCHI在不同桂花品種、不同組織中的表達量進行檢測。對桂花不同品種的表達特性進行分析，基因在桂花中的表達量于花青苷的含量呈正相關。對桂花不同器官中的表達特性進行分析，Of

5、CHI在3種桂花中均表現為在葉中表達量最大，并遠遠高于莖和花，莖中次之，花中最低。顯著性分析可知，在3種桂花中，葉中的表達量與花和莖差異性均達到顯著水平，而花和莖之間的差異性不顯著。
　　(3)用pH示差法對不同桂花品種花瓣中的花青苷含量進行了檢測?！燃t丹桂’的花青苷含量最高，為1.57mg/100g，‘金桂’與‘早銀桂’的花青苷含量較低，分別為:0.19mg/100g和0.06mg/100g。‘橙紅丹桂’花青苷含量與‘金桂’和