鴨HO和BVR基因片段的克隆及mRNA表達(dá)量的研究.pdf

1、血紅素加氧酶（heme oxygenase，HO）是一種最廣泛存在的抗氧化防御酶，是熱休克蛋白家族中的一員，HO為血紅素代謝的限速酶，可代謝血紅素生成CO、膽綠素和游離鐵。膽綠素隨后被膽綠素還原酶（biliverdin reductase，BVR）還原成膽紅素，而游離鐵與轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合。蛋殼顏色是蛋鴨的一個(gè)重要經(jīng)濟(jì)性狀，它是由蛋殼中的色素的成分和含量決定的，而膽綠素還原酶和血紅素加氧酶是色素代謝過程中的關(guān)鍵酶。本文通過鴨子宮部提取的總RN

2、A為模板，利用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增出部分鴨HO和BVR基因cDNA編碼序列，通過克隆測(cè)序后進(jìn)行序列分析，并建立相對(duì)定量RT-PCR檢測(cè)方法，對(duì)兩種基因mRNA表達(dá)量進(jìn)行研究。
　　 根據(jù)GenBank登錄的雞、小鼠、牛、蟾蜍和人HO和BVR基因的編碼區(qū)序列比對(duì)結(jié)果，利用其保守區(qū)域應(yīng)用Primer5.0設(shè)計(jì)引物，以縉云麻鴨子宮部的總RNA為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)。將PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后回收，與克隆載體pMD19-T連接后，并轉(zhuǎn)

3、化E.coli YM109，加入SOC培養(yǎng)基培養(yǎng)，將培養(yǎng)液涂于含有X-Gal，IPTG，AMP的瓊脂平板培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)過夜。用藍(lán)白斑篩選陽性克隆，挑取白斑于含有AMP的LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)。用質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒，經(jīng)雙酶切和菌液PCR兩種方法驗(yàn)證陽性克隆，擴(kuò)增片段分別為364bp和634bp片段，將其與GenBank中已發(fā)表的雞、小鼠、牛、蟾蜍和人的HO和BVR港因cDNA序列及推測(cè)的氨基酸序列對(duì)比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)鴨HO基因的cDNA

4、與雞、小鼠、牛、蟾蜍和人HO基因的cDNA序列分別有93.1％，70.4％，70.1％，63.6％，71.5％的同源性，氨基酸分別有98.4，91.1％，59.3％，86.2％，91.1％的同源性；鴨BVR基因的cDNA與雞、小鼠、牛、蟾蜍和人BVR基因的cDNA序列分別有92.6％，64.9％，62.8％，69.0％，63.6％的同源性，氨基酸分別有96.2％、59.7％、60.7％、68.4％、59.7％的同源性。因此可以推斷該基因