克拉維酸的發(fā)酵優(yōu)化及分離純化.pdf

1、克拉維酸(clavulanic acid,CA),是由帶棒鏈霉菌產(chǎn)生的一種次級代謝產(chǎn)物,它由β-內(nèi)酰胺環(huán)(C<,3>)和噻唑環(huán)(C<,5>)構(gòu)成.克拉維酸作為一種β-內(nèi)酰胺酶抑制劑,能抑制由大腸桿菌之類的革蘭氏陰性和革蘭氏陽性致病菌產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶.克拉維酸本身的抑菌效果非常微弱,臨床上主要將其與β-內(nèi)酰胺類藥物聯(lián)合應(yīng)用,例如阿莫西林和替卡西寧鈉鹽等.該試驗(yàn)主要利用序貫試驗(yàn)設(shè)計(jì)(Plackett-Burman、析因設(shè)計(jì)、響應(yīng)面設(shè)計(jì)和最

2、速爬坡法等),以帶棒鏈霉菌作為發(fā)酵菌種,在培養(yǎng)基(g/1)為:大豆粉,35.86;甘油,15;KH<,2>PO<,4>,0.125;MgSO<,4>·7H<,2>O,0.25;FeSO<,4>·7H<,2>O,0.42;鳥氨酸,1.13,以及接種量4.5mL/30mL,pH6.8的培養(yǎng)條件下發(fā)酵,獲得克拉維酸最大產(chǎn)量,約為706ug/mL.外界環(huán)境因子對CA降解速率的影響大小不同,通過對帶棒鏈霉菌對數(shù)生長期和穩(wěn)定期CA降解情況的研究,可

3、以判斷,在pH、溫度等發(fā)酵條件一定的情況下,導(dǎo)致發(fā)酵后期CA嚴(yán)重降解的原因可能與菌體生長過程中產(chǎn)生的熱敏性物質(zhì)或者穩(wěn)定期產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物有關(guān).在Al<,2>(SO<,4>)<,3>·18H<,2>O為4.81g/L,殼聚糖為214.2mmol/L時,克拉維酸發(fā)酵液的沉淀效果最好,而克拉維酸的損失不到5﹪.以丁醇和乙酸乙酯(1:4)為萃取劑、油水比為3.76、pH2和8℃下分離純化克拉維酸,萃取率為90.49﹪,溶脹率4.13﹪.通過基