乳糖酶固態(tài)發(fā)酵條件的優(yōu)化及其分離純化的研究.pdf

1、乳糖酶(Lactase)稱為β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶(β-D-galactosidegalactohydrolase，EC.3.2.1.23)，簡稱為β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)，其廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、分析的領(lǐng)域。本課題以毛霉作為出發(fā)菌株，采用固態(tài)培養(yǎng)的方式，對(duì)固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)的成分和發(fā)酵條件進(jìn)行了詳細(xì)研究，同時(shí)建立了一套簡單易行的乳糖酶提取純化方法并對(duì)該乳糖酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了初步研究。
　　 (1)通過單

2、因素和正交試驗(yàn)確定了本實(shí)驗(yàn)室的亮色毛霉菌株產(chǎn)乳糖酶的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的主要成分是麩皮和水，其比例是1:1.5；外加碳源乳糖0.05g/mL、外加氮源蛋白胨0.04 g/mL、接種量為10％、無機(jī)鹽磷酸二氫鉀添加量為0.1％。重復(fù)利用發(fā)酵過的培養(yǎng)基可使乳糖酶的產(chǎn)量增加45％。
　　 通過單因素實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)24h后，菌株開始分泌生產(chǎn)乳糖酶，72h后乳糖酶產(chǎn)量達(dá)到最大值；最佳的培養(yǎng)溫度為45℃；每24h翻曲一次可以使乳糖酶

3、的產(chǎn)量最大化。最終得到的乳糖酶的酶活力為2.45U/g曲。
　　 (2)通過對(duì)不同絮凝劑對(duì)乳糖酶粗酶液絮凝效果的研究，確定了無機(jī)絮凝劑硫酸鋁有較好的絮凝效果，其最優(yōu)添加量為0.002g/mL(粗酶液)。在30℃下，其絮凝效果最佳。在該條件下，過濾速度為1.52mL/min，絮凝率為88.27％，澄清率為91.46％，酶回收率87.9％。
　　 (3)該乳糖酶經(jīng)過硫酸分級(jí)鹽析、SephadexG-100和DEAE-纖維素-