冷藏養(yǎng)殖大黃魚特定腐敗菌及其群體感應(yīng)信號分子DKPs鑒定與功能的研究.pdf

1、微生物是絕大多數(shù)水產(chǎn)品腐敗變質(zhì)的主要因素。但是，只有小部分產(chǎn)生不良氣味和有毒有害物質(zhì)的微生物能夠引起水產(chǎn)品腐敗，被稱為特定腐敗菌。在貯藏過程中，特定腐敗菌會隨著貯藏條件的不同而表現(xiàn)出多樣性。低溫貯藏中水產(chǎn)品的特定腐敗菌是希瓦氏菌屬（Shewanella spp.）和假單胞菌屬（Pseudomonas spp.）。近幾年，希瓦氏菌屬因其在魚及魚制品中表現(xiàn)出的腐敗能力而被廣泛關(guān)注，它是一類革蘭氏陰性菌，能夠產(chǎn)生H2S，具有運動性。
　

2、　群體感應(yīng)信號分子具有密度依賴性，在腐敗菌中它能夠調(diào)控特定的基因表達致使食品腐敗。因此，本文的研究目的是鑒定養(yǎng)殖大黃魚在4℃低溫貯藏中的特定腐敗菌，并用GC-MS方法檢測該特定腐敗菌的群體感應(yīng)信號分子。該研究為將來創(chuàng)造新的水產(chǎn)品保鮮劑提供了新的思路與途徑。
　　本論文的研究內(nèi)容包括以下3個部分:
　　1.從4℃空氣包裝養(yǎng)殖大黃魚中共分離得到102個菌株，74株(72.5％)為產(chǎn)H2S的菌株。通過傳統(tǒng)的生化分析和16S rDN

3、A的分子標記鑒定，74株中有60株菌(81.1％)是希瓦氏菌屬，其中Shewanella baltica48株(64.9％)，剩下的14株菌(18.9％)為氣單胞菌屬（Aeromonas）和腸桿菌屬（Enterobacteriaceae）。因此，低溫貯藏養(yǎng)殖大黃魚的特定腐敗菌是S.baltica。
　　2.48株不同的S.baltica分別接種于無菌魚汁中，通過測定揮發(fā)性鹽基氮和感官分析（氣味）來評估其腐敗能力。所有的結(jié)果表明，S

4、.baltica025的腐敗能力大于其他所有的菌株，S.baltica003的腐敗能力小于其他所有的菌株，由此可見，不同的S.baltica菌株的腐敗能力不同。為了從基因上找出兩菌株的差異，更好地理解其在水產(chǎn)品腐敗上的原理依據(jù)，進一步的研究是測定S. baltica003和S.baltica025兩菌株的全基因，并通過16S rDNA分析發(fā)現(xiàn)S.baltica003為S.baltica OS223，S.baltica025為S.balt

5、ica OS185。經(jīng)過兩個菌株全基因的比較發(fā)現(xiàn)氧化三甲胺還原酶，胱氨酸合成酶和生物胺類合成酶存在基因上的差異性。
　　3.通過氣質(zhì)聯(lián)用從具有最強腐敗能力的S.baltica025的培養(yǎng)液中分離鑒定得到四種具有群體感應(yīng)信號分子作用的二酮哌嗪類化合物。在S.baltica025培養(yǎng)液中添加化學(xué)合成的四種 DKPs(cyclo-(L-Pro-L-Gly)，cyclo-(L-Pro-L-Leu)，cyclo-(L-Leu-L-Leu)和

6、cyclo-(L-Pro-L-Phe))，以此獲得了添加不同誘導(dǎo)物的細菌S.baltica025代謝產(chǎn)物粗提液，再將此類粗提取物接種于無菌養(yǎng)殖大黃魚魚汁中，定期對其進行揮發(fā)性鹽基氮(TVB-N)測定。結(jié)果表明魚汁經(jīng)過5天貯藏后實驗組相較于空白組腐敗明顯，經(jīng)cyclo-(L-Pro-L-Phe)處理后的魚汁腐敗最明顯，而經(jīng)cyclo-(L-Pro-L-Leu)處理后的魚汁腐敗最弱，說明DKPs對S.baltica的腐敗活性具有正調(diào)控作用。