大黃魚IFN-γ的分子特征及其功能研究.pdf

1、干擾素γ（IFN-γ）是I型輔助T細胞（Th1）標志性的細胞因子，在免疫和炎癥反應的幾乎所有階段都發(fā)揮著重要的作用。研究表明，哺乳類IFN-γ是一種多效能的細胞因子，能增強抗病毒反應、抗腫瘤反應、增強抗原遞呈作用、激活并介導炎性反應、促進 Th1免疫反應以及調(diào)控細胞增殖和凋亡等功能。目前已經(jīng)有研究報道克隆出了多個魚種的IFN-γ基因，且在一些魚類中還發(fā)現(xiàn)了IFN-γ基因的同源物IFN-γrel。目前對魚類IFN-γ的研究主要集中在其分子

2、及表達特征方面，與哺乳類相比，目前對魚類I FN-γ的功能認識還不夠深入，因此有待于對魚類IFN-γ功能進行全面且深入的研究。因此，本文展開我國重要海水經(jīng)濟魚種——大黃魚IFN-γ（LycIFN-γ）的分子特征及功能研究，將有助于深入了解大黃魚IFN-γ在免疫反應中的功能，也為其病害防治提供新的思路。
　　本文克隆了LycIFN-γ基因全長cDNA，長1466 bp，編碼由200個氨基酸組成的蛋白。推斷的LycIFN-γ蛋白包含魚

3、類IFN-γ的標識序列V157QSKALWELSGI168，及C末端由4個堿性氨基酸組成的核定位信號序列（RRRR）。組織表達分析顯示，LycIFN-γ在各種組織，如腦、腸、頭腎、皮膚、鰓、肝臟、脾臟、心臟和血液等中為組成型表達。LycIFN-γ在幾種免疫相關(guān)細胞，如大黃魚原代粒細胞、巨噬細胞、頭腎白細胞和大黃魚頭腎細胞系（LYCK）中也均有表達。poly（I:C）和三聯(lián)細菌滅活疫苗刺激后，LycIFN-γ轉(zhuǎn)錄水平在大黃魚脾臟和頭腎組織

4、中顯著上調(diào)。同樣在poly（I:C）和LPS刺激條件下，LycIFN-γ轉(zhuǎn)錄水平在大黃魚原代頭腎白細胞中也發(fā)生明顯上調(diào)。在大腸桿菌BL21中重組表達的LycIFN-γ融合蛋白（rLycIFN-γ）不僅能夠增強大黃魚巨噬細胞的呼吸爆發(fā)反應、上調(diào)誘導型一氧化氮合酶基因（iNOS）的轉(zhuǎn)錄水平以及一氧化氮（NO）的釋放，而且還可上調(diào)炎癥因子腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白介素-1β（IL-1β）的轉(zhuǎn)錄水平，這表明LycIFN-γ可參與大黃魚的

5、炎性反應。在rLycIFN-γ處理的大黃魚頭腎白細胞中，IFN-γ受體細胞因子受體B（CRFB13），信號傳導及轉(zhuǎn)錄激活因子（STAT1），轉(zhuǎn)錄因子干擾素調(diào)節(jié)因子（IRF1）和T-bet（T-box expressed in T cells），Th1相關(guān)細胞因子IFN-γ和白細胞介素-2（interluekin-2，IL-2）的轉(zhuǎn)錄水平均發(fā)生上調(diào)，表明LycIFN-γ可能具有促進Th1免疫反應的功能。這些結(jié)果提示LycIFN-γ可能具有