果糖提高crtEBI重組大腸桿菌合成番茄紅素產(chǎn)量的研究.pdf

1、番茄紅素是一種重要的類胡蘿卜素,具有良好的抗氧化、抗腫瘤、抗炎等生理藥理活性,因而廣泛應(yīng)用于功能性食品、飼料、營(yíng)養(yǎng)制品、藥品和化妝品中。近年來(lái),隨著人們對(duì)化學(xué)合成品毒副作用的擔(dān)心及對(duì)天然品的日益崇尚,微生物發(fā)酵法生產(chǎn)番茄紅素,逐漸受到研究人員的重視。
　　為了提高大腸桿菌合成番茄紅素的產(chǎn)量,本研究首先以大腸桿菌DH5α、BL21(DE3)、K-12、JM109為宿主菌,成功構(gòu)建了4株crtEBI重組大腸桿菌,對(duì)番茄紅素產(chǎn)量的分析結(jié)

2、果表明以K-12為宿主獲得的番茄紅素產(chǎn)量最高;在此基礎(chǔ)上,通過(guò)分析不同條件下重組菌的菌體濃度和番茄紅素的產(chǎn)量,初步確定了E.coliK-12(crtEBI)培養(yǎng)條件。此外,本研究還根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,通過(guò)PCR技術(shù)克隆獲得dxs基因,構(gòu)建E.coli K-12(crtEBI/dxs)重組菌,但結(jié)果顯示番茄紅素產(chǎn)量提高并不明顯;接下來(lái),通過(guò)在培養(yǎng)基添加不同的碳源、氮源和TCA中間產(chǎn)物以改變E.coli K-12(crtEBI)重組大腸桿菌番茄紅

3、素的產(chǎn)量,結(jié)果證明在LB培養(yǎng)基中添加6g/L果糖后可顯著提高番茄紅素的產(chǎn)量。同時(shí)E.coli K-12(crtEBI)生長(zhǎng)曲線劑番茄紅素產(chǎn)量曲線的測(cè)定結(jié)果也顯示果糖是比葡萄糖更為有效的提高番茄紅素產(chǎn)量的附加碳源。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步用E.coliK-12(crtEBI)進(jìn)行了5L發(fā)酵罐合成番茄紅素放大實(shí)驗(yàn),最終獲得番茄紅素的產(chǎn)量約為1800mg/L。最后,通過(guò)RT-PCR分析不同條件下FruA、FruK、Glk、PfkA、Pck、Ppc、Pps和