若干植物活性成分與蛋白質(zhì)的相互作用研究.pdf

1、本論文主要運(yùn)用熒光光譜、紫外.可見光譜、紅外光譜(FT-IR)、圓二色譜(CD)及原子力顯微鏡、分子模擬等技術(shù),對(duì)蛋白質(zhì)與植物活性因子的相互作用進(jìn)行了研究,并通過(guò)蛋白質(zhì)內(nèi)源熒光的猝滅、二級(jí)結(jié)構(gòu)變化和外源物質(zhì)對(duì)蛋白質(zhì)-藥物分子結(jié)合過(guò)程產(chǎn)生的影響等方面的研究,從分子水平上闡述蛋白質(zhì)與植物活性因子的作用機(jī)制,對(duì)了解藥物在體內(nèi)的運(yùn)輸、代謝、分配過(guò)程以及新藥的設(shè)計(jì)與開發(fā)都具有重要的意義。
　　 論文共分為五個(gè)部分,主要結(jié)論概述如下:

2、>　　 1.簡(jiǎn)要介紹了牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HAS)和胰蛋白酶的結(jié)構(gòu)、功能和性質(zhì);綜述了藥物小分子與蛋白質(zhì)相互作用的研究現(xiàn)狀和研究方法,并著重介紹了熒光光譜法、紅外光譜法以及圓二色譜法在本研究領(lǐng)域的應(yīng)用情況。
　　 2.在生理酸度條件下(pH7.4),采用熒光光譜法、紫外-可見光譜法、傅里葉變換紅外光譜法以及圓二色譜法研究了杜鵑素與BSA的相互作用。研究表明,杜鵑素與BSA相互作用形成了新的復(fù)合物,即杜鵑素以靜

3、態(tài)猝滅方式猝滅BSA的內(nèi)源熒光;熱力學(xué)參數(shù)焓變(△H)和熵變(6S)值分別為-29.92 kJ·mol-1和5.061 J·mol-1·K-1,表明二者之間的作用力主要是氫鍵和疏水作用力。競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)表明,杜鵑素在BSA上的結(jié)合位點(diǎn)位于Site I。FT-IR和CD光譜結(jié)果證實(shí)杜鵑素能夠誘導(dǎo)BSA二級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。同時(shí),研究了維生素C(VC)、維生素B2(VB2)和葡萄糖對(duì)杜鵑素-BSA結(jié)合的擾動(dòng)。
　　 3.采用熒光、共振瑞利散射

4、、圓二色等光譜方法和原子力顯微鏡(AFM)以及分子對(duì)接技術(shù),研究了金絲桃苷與人血清白蛋白(HAS)的相互作用。研究發(fā)現(xiàn),金絲桃苷能顯著猝滅HAS的熒光,且金絲桃苷與HAS結(jié)合主要靠疏水作用力和氫鍵驅(qū)動(dòng)。CD譜顯示,金絲桃苷誘導(dǎo)HAS的二級(jí)結(jié)構(gòu)產(chǎn)生稍許的變化。AFM圖像和共振散射光譜表明,與金絲桃苷結(jié)合后HAS的分子直徑變大,產(chǎn)生相互聚集。利用分子對(duì)接技術(shù)預(yù)測(cè)金絲桃苷與HAS的作用區(qū)域位于HAS亞結(jié)構(gòu)域IIA,預(yù)測(cè)結(jié)果與位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果吻

5、合。
　　 4.采用熒光光譜法、紫外光譜法、紅外光譜法、圓二色譜法和原子力顯微鏡研究了香葉木素與人血清白蛋白的結(jié)合作用。研究表明,靜態(tài)猝滅是香葉木素導(dǎo)致HAS熒光猝滅的主要原因;由求得的熱力學(xué)參數(shù),確定了二者之間的作用力是疏水作用。競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)和不同構(gòu)型的HAS與香葉木素作用實(shí)驗(yàn)表明,香葉木素在HAS上的結(jié)合位點(diǎn)位于Domain IIA的疏水腔中,即Site I。FT-IR和CD光譜分析表明,香葉木素能夠使HAS的構(gòu)象發(fā)生變化。AF

6、M和共振銳利散射光譜顯示金絲桃苷能與HAS結(jié)合并導(dǎo)致:HAS分子聚集。
　　 5.應(yīng)用熒光光譜和圓二色譜技術(shù),在生理酸度條件下(pH7.4),研究了芒果苷與胰蛋白酶的相互作用。實(shí)驗(yàn)揭示了芒果苷能與胰蛋白酶結(jié)合形成基態(tài)復(fù)合物從而猝滅胰蛋白酶的熒光。由van’t Hoff方程求得的熱力學(xué)參數(shù),表明芒果苷和胰蛋白酶之間的作用力類型是疏水作用。根據(jù)F(o)rster非輻射能量轉(zhuǎn)移理論計(jì)算出芒果苷在胰蛋白酶中的結(jié)合位置與胰蛋白酶中色氨酸殘