順序注射熒光法測(cè)定堿性磷酸酶及其應(yīng)用.pdf

1、堿性磷酸酶(ALP)是一種廣泛存在于人體、動(dòng)物、植物及微生物體內(nèi)的膜結(jié)合蛋白，在堿性條件下具有催化活性。堿性磷酸酶活性檢測(cè)在食品檢驗(yàn)以及臨床診斷方面具有十分重要的作用。高度自動(dòng)化、程序化的順序注射技術(shù)不僅能夠精確控制反應(yīng)條件，而且還能有效降低試劑試樣的消耗，在與酶促反應(yīng)相關(guān)研究中逐漸引起關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)是以堿性磷酸酶為研究對(duì)象，建立以順序注射為基礎(chǔ)的酶法分析系統(tǒng)，進(jìn)而應(yīng)用于實(shí)際樣品的即時(shí)評(píng)價(jià)。主要工作有以下兩方面：
　　 1.以4-

2、甲基傘形酮磷酸酯(4-MUP)為底物，建立了堿性磷酸酶的順序注射熒光分析系統(tǒng)。在系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行了試劑試樣濃度、取樣體積、反應(yīng)時(shí)間、流速等影響酶促反應(yīng)的因素的優(yōu)化，并對(duì)檢測(cè)堿性磷酸酶的性能進(jìn)行了評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，堿性磷酸酶在50～1000mU/L的活性范圍內(nèi)有較好的線性范圍，其回歸方程為△F=143.4CALP+6.859(r2=0.9988)；根據(jù)IUPAC推薦的方法計(jì)算出檢出限為14 mU/L；對(duì)200 mU/L ALP標(biāo)液進(jìn)行11次測(cè)定得

3、到了方法相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為2.3％；試劑消耗量低，試樣與底物消耗的體積分別為20μL、40μL；操作簡(jiǎn)單、分析速度快以及自動(dòng)化程度高，分析頻率為15 h-1。
　　 2.牛乳制品中含有一定量的堿性磷酸酶，其熱穩(wěn)定性比病原菌要高，因此，堿性磷酸酶活性可以作為巴氏消毒水平的評(píng)價(jià)指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)將上述建立的順序注射熒光法應(yīng)用于鮮奶和巴氏牛奶中堿性磷酸酶活性檢測(cè)并進(jìn)行了加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確度較高，能夠評(píng)價(jià)牛奶巴氏滅菌水平。與I