細胞傳感器的構(gòu)建及其在細胞表面糖表達分析中的應用.pdf

1、細胞表面含有豐富的聚糖。其功能比較復雜，參與了絕大部分真核生物的生命過程。細胞表面糖表達的分析與檢測對幫助我們理解和揭示其生理功能意義重大。本論文主要內(nèi)容如下:
　　(1)合成了樹枝狀高分子-石墨烯納米材料?；跇錉罡叻肿覲AMAM(DEN)末端氨基與氧化石墨烯(GO)表面功能基團羧基、環(huán)氧基的共價交聯(lián)，將球狀DEN修飾在GO表面獲得功能化的氧化石墨烯復合物。利用水合肼的還原性，將該GO還原為石墨烯(rGO)，得到rGO-DEN復

2、合材料。實驗證明該材料具有較好的穩(wěn)定性，能為電極界面生物分子的修飾提供多價結(jié)合作用。同時，也為接下來細胞傳感器的構(gòu)建提供一種較好的修飾材料。
　　(2)構(gòu)建了一種細胞電化學傳感器用于細胞表面N-聚糖表達的檢測。該傳感器利用了能識別細胞表面N-聚糖的伴刀豆凝集素(ConA)，合成的rGO-DEN納米材料，以及辣根過氧化物酶-適配體-納米金（HRP-aptamer-AuNPs）信標。電極表面修飾的rGO-DEN，不僅能提高電極界面的電

3、子傳遞效率，還能為細胞捕獲提供多價識別作用。納米信標不但可為實驗提供電化學探針，還能提高該細胞實驗的選擇性。實驗數(shù)據(jù)表明，該細胞電化學傳感器能靈敏地檢測人急性淋巴細胞白血病細胞(CCRF-CEM)并應用于細胞表面N-聚糖抑制劑的分析。檢測限低至10cellmL-1。該高選擇性傳感器在藥物篩選方面有重要應用，也能夠為理解某些生物過程和相關(guān)疾病中N-聚糖的作用提供新思路。
　　(3)發(fā)展了一種堿性磷酸酶(ALP)響應的電化學發(fā)光(EC

4、L)猝滅適配體傳感器用于動態(tài)分析細胞表面N-聚糖的表達。首先，電極界面修飾的rGO-DEN納米材料用于固定適配體，發(fā)揮多價識別和信號放大的作用，從而高選擇性地捕獲細胞。同時，納米信標ALP-ConA-AuNPs作為細胞表面N-聚糖表達的檢測探針，利用了ConA對細胞表面N-聚糖核心結(jié)構(gòu)三甘露聚糖的識別以及ALP響應的釕聯(lián)吡啶電化學發(fā)光猝滅。通過該方法，可以檢測低至38cellsmL-1的CCRF-CEM細胞。該傳感器實現(xiàn)了在血清中的細胞