PEG-AMP酯的合成、理化性質(zhì)及其藥理活性的初步研究.pdf

1、研究背景:
　　 蛇葡萄素(Ampelopsin，AMP)，是從粵蛇葡萄或顯齒蛇葡萄中提取的小分子黃酮類化合物。經(jīng)過(guò)本實(shí)驗(yàn)室多年來(lái)的抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)其對(duì)酪氨酸酶的活性有明顯的抑制作用，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)對(duì)生長(zhǎng)因子VEGF和bFGF有明顯的抑制作用。經(jīng)過(guò)幾年的一系列抗腫瘤實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)AMP在體外對(duì)人白血病HL-60、K562、人鼻咽癌HK-1、人乳腺癌MCF-7、肝癌Bel-7402和HepG2等腫瘤細(xì)胞株有顯著的生長(zhǎng)抑制作用；在體

2、內(nèi)對(duì)C57BL/6小鼠B16黑色素瘤和人肺癌GLC-82裸鼠移植瘤有顯著的抑制生長(zhǎng)作用。我們的前期研究顯示，AMP能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞(HL-60，K562 and Bel-7402)的凋亡。同時(shí)我們的初步研究顯示，蛇葡萄素能逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥(Multidmg resistance，MDR)。盡管蛇葡萄素有毒性低而來(lái)源廣泛，提取率高的優(yōu)點(diǎn)，但其穩(wěn)定性差，水溶性低，這給實(shí)際應(yīng)用帶來(lái)困難。
　　 聚乙二醇(Polyethylene

3、glycol,PEG)修飾劑是pH中性、無(wú)毒、水溶性的聚合物，藥物的PEG化成為近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種用于改進(jìn)藥物體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)的新方法，PEG化應(yīng)用于增加藥物的穩(wěn)定性、溶解性、提高生物利用度、提高受體親和力、延長(zhǎng)體內(nèi)半衰期等。但目前的PEG修飾技術(shù)主要集中于靜脈給藥的多肽和蛋白類藥物的研究中。由于PEG修飾技術(shù)具有的優(yōu)勢(shì)，其在小分子藥物，尤其是在難溶性小分子結(jié)構(gòu)改造中具有極大的應(yīng)用潛力。對(duì)蛇葡萄素進(jìn)行PEG化是對(duì)AMP結(jié)構(gòu)改造、修飾的一

4、個(gè)方法。
　　 研究目的:
　　 本課題擬以酯的形式PEG化合成一系列新化合物，通過(guò)過(guò)柱分離純化，核磁共振、紫外、紅外等檢測(cè)方法對(duì)新化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。以理化方法測(cè)定其溶解度和pKa值，以體外培養(yǎng)人白血病細(xì)胞K562為模型，通過(guò)MTT法，研究新化合物對(duì)K562細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響。其意義在于改善AMP的水溶性，油水分配系數(shù)，評(píng)價(jià)其新化合物相對(duì)AMP的活性，為開(kāi)發(fā)更多的新的抗腫瘤藥衍生物提供研究資料和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　

5、 方法:
　　 1.以丁二酸酐為連接基團(tuán)，用縮合劑將PEG與蛇葡萄素縮合成酯衍生物；通過(guò)過(guò)柱分離純化，并進(jìn)行核磁共振、紫外、紅外等檢測(cè)方法對(duì)新化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。
　　 2.通過(guò)理化方法測(cè)定新化合物的溶解度、pKa值。
　　 3.常規(guī)培養(yǎng)人白血病K562細(xì)胞株，用MTT法檢測(cè)新化合物的細(xì)胞增殖抑制率，分析是否具有時(shí)間和濃度依賴性。
　　 結(jié)果:
　　 1.經(jīng)過(guò)柱分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定確定合成2個(gè)全新的

6、化合物，分別得到化合物2：3，4-二氫-3，5-二羥基-2-(3，4，5-三羥基苯)-4-氧代-2H-苯并吡喃-7-丁二酸聚乙二醇400單酯化合物3∶3，4-二氫-3，5-二羥基-2-(3，4，5-三羥基苯)-4-氧代-2H-苯并吡喃-7-丁二酸聚乙二醇1000單酯
　　 2.AMP、化合物2、化合物3的溶解度分別為0.238，0.865，14.589 mg/ml?；衔?、化合物3相對(duì)AMP水溶性有很大的提高，化合物2溶解度是

7、AMP的3.63倍，化合物3溶解度是AMP的61.29倍?；衔?、化合物3、AMP的pKa分別是8.17、7.63、8.39。
　　 3.常規(guī)培養(yǎng)人白血病K562細(xì)胞株，1.25μmol/L、2.5μmol/L、5.0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L7個(gè)濃度水平的化合物2對(duì)K562細(xì)胞有增殖抑制作用，且呈明顯的濃度和時(shí)間依賴性關(guān)系。并在24 h、48 h、72 h的半數(shù)抑制濃

8、度(IC50)分別是(12.87±2.04)μmol/L、(8.85±1.18)μmol/L、(9.46±2.33)μmol/L，與同濃度的AMP組的48 h的IC50做比較，抑制率與AMP相當(dāng)，P=0.153無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 4.常規(guī)培養(yǎng)人白血病K562細(xì)胞株，1.25μmol/L、2.5μmol/L、5.0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L7個(gè)濃度水平的化合物3對(duì)K562

9、細(xì)胞有增殖抑制作用，且呈明顯的濃度和時(shí)間依賴性關(guān)系。并在24 h、48 h、72 h的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別是(12.26±2.02)、(9.14±0.5)、(8.23±0.94)μmol/L,與同濃度的AMP組的48 h的IC50做比較，抑制率與AMP相當(dāng)，P=0.172無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論:
　　 1.通過(guò)合成、分離純化、鑒定得2個(gè)PEG-AMP酯化合物。
　　 2.通過(guò)理化方法測(cè)得化合物的溶解度