磷脂酶高產(chǎn)菌株的篩選及其在大豆油脫膠中的應(yīng)用研究.pdf

1、酶法脫膠具有反應(yīng)條件溫和、油損耗低、經(jīng)濟(jì)環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)，以酶法脫膠替代傳統(tǒng)的脫膠方法具有良好的應(yīng)用前景。目前，酶法脫膠使用的主要是丹麥諾維信公司生產(chǎn)的微生物磷脂酶A1 (Lecitase Ultra)，價格昂貴，在一定程度上限制了我國酶法脫膠的工業(yè)化應(yīng)用。鑒于此，本文對磷酯酶高產(chǎn)菌株的篩選鑒定以及終選菌株的發(fā)酵產(chǎn)酶條件和磷脂酶酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究，并對磷脂酶在大豆油脫中的應(yīng)用進(jìn)行了探討，主要結(jié)果如下：
　　 1.以大豆磷脂為唯一碳源的

2、限制性培養(yǎng)基從富油土樣中篩選得到136株產(chǎn)磷脂酶的微生物，其中菌株BIT-18產(chǎn)的磷脂酶活力最高。經(jīng)菌株菌落形態(tài)、生理生化特征以及16S rDNA序列分析，鑒定為Pseudomonas fluorescens。在GenBank數(shù)據(jù)庫中的登陸號為GU367870。
　　 2.利用選育得到的P.fluorescens BIT-18進(jìn)行液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)磷酯酶，對其發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化。優(yōu)化后的最適發(fā)酵培養(yǎng)基成分為：可溶性淀粉10.0 g.L

3、-1，牛肉膏10.0 g.L-1，大豆磷脂5g.L-1，NaCl2 5.0 g.L-1，MgS04·7H2O0.5g.L-1，Tween 80 2.0％；最適發(fā)酵條件為：溫度30℃，pH 8.0，接種量為8％，種齡12 h，裝液量為20％。在優(yōu)化條件下，P.fluorescens BIT-18液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)磷脂酶的最高酶活力達(dá)24.9 U.mL-1。
　　 3.對P.fluorescensBIT-18磷脂酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究。結(jié)果

4、表明，該酶的最適反應(yīng)溫度為25℃，最適pH值為6.5；且在50℃、pH 3.0-8.0的范圍內(nèi)穩(wěn)定性較好。低濃度的金屬離子有利于磷脂酶酶促反應(yīng)的進(jìn)行，其中以0.1mmol.L-1的Ca2+對酶促反應(yīng)的促進(jìn)作用最強(qiáng)；而高濃度的金屬離子對酶促反應(yīng)有抑制作用，以5mmol.L-1的Ca2+和Co2+的抑制作用最強(qiáng)。
　　 4.在自制間歇式反應(yīng)器中以P.fluorescens BIT-18磷脂酶為催化劑對大豆油進(jìn)行酶法脫膠，單因子試驗結(jié)