溶菌酶高產(chǎn)菌株的篩選及其產(chǎn)酶研究.pdf

1、本論文系統(tǒng)研究了產(chǎn)溶菌酶菌株的分離篩選及鑒定，發(fā)酵條件的優(yōu)化和粗酶液酶學(xué)性質(zhì)，研究結(jié)果如下: 從不同地區(qū)采集的156個(gè)土壤樣品中進(jìn)行篩選，最終，從河北農(nóng)業(yè)大學(xué)標(biāo)本園的果園土壤中篩選得到一高產(chǎn)菌株。通過(guò)產(chǎn)酶菌株的分離篩選，建立了一套快速、準(zhǔn)確的溶菌酶高產(chǎn)菌株篩選方法:通過(guò)添加金黃色葡萄球菌的雙層平板分離初篩，瓊脂打孔法進(jìn)行高抑菌活性菌株的初步篩選，驗(yàn)證抑菌物質(zhì)的初篩方法，測(cè)定酶活力的復(fù)篩的方法:確定了合理、客觀的綜合考察酶活的方法

2、。 對(duì)菌株S2-6b進(jìn)行鑒定，分別在光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡下觀察了菌體形態(tài)、大小，并對(duì)其在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上的單菌落形態(tài)、大小、顏色等特征進(jìn)行了描述；通過(guò)一系列生理生化試驗(yàn)及16SrDNA保守序列的分析，將此菌株初步鑒定為溶桿菌(Lysobacter S2-6b)。 對(duì)溶桿菌S2-6b的發(fā)酵條件進(jìn)行了研究，確定其最佳培養(yǎng)基成分及最佳培養(yǎng)條件。研究了不同碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、表面活性劑、不同培養(yǎng)溫度、時(shí)間、pH值等主要因素對(duì)溶桿菌

3、S2-6b產(chǎn)酶的影響，進(jìn)行發(fā)酵條件優(yōu)化，優(yōu)化結(jié)果表明，菌株產(chǎn)酶優(yōu)化的培養(yǎng)基為，可溶性淀粉1.25％，牛肉膏2.5％，玉米漿1.0％，Tween-80 0.1％；優(yōu)化發(fā)酵條件為，接種量3％，發(fā)酵培養(yǎng)基的起始pH為7.0，裝液量40/300 mL，搖床28℃，200 r/min，培養(yǎng)40 h。經(jīng)過(guò)發(fā)酵條件優(yōu)化，菌株產(chǎn)酶活力可達(dá)6 166.67U/mL。 酶學(xué)性質(zhì)研究發(fā)現(xiàn)，菌株溶菌酶的基本酶學(xué)性質(zhì)為:最適作用溫度75℃，75℃下的半衰

4、期為17.3 min；最適作用pH值為7.0，酶的pH穩(wěn)定范圍在3.0～11.0之間；其中，M2+，Mn2+，Cu2+，A13+，Ca2+對(duì)溶菌酶水解底物有不同程度的抑制，酶活力分別下降了41.7％，40.8％，40.6％，16.7％，12.5％，其他金屬離子對(duì)酶活力基本沒(méi)有影響。SDS對(duì)溶菌酶的活性抑制明顯，使酶活力下降了33.5％。EDTA使酶活力升高了17％。與雞卵清溶菌酶相比較，S2-6b溶菌酶對(duì)受試菌株有不同程度的抑制和殺滅作