羧甲基殼聚糖衍生物的制備及其性能研究.pdf

1、羧甲基殼聚糖是一種重要的殼聚糖水溶性衍生物。因其良好的生物活性，近年來已有不少學(xué)者在較為廣泛的領(lǐng)域內(nèi)對(duì)羧甲基殼聚糖及其衍生物的制備方法,以及其在醫(yī)藥、環(huán)保、化妝品、食品等領(lǐng)域的應(yīng)用前景展開了研究。本論文分別以膠原蛋白肽接枝羧甲基殼聚糖季銨鹽，以硫酸軟骨素和RGD肽接枝羧甲基殼聚糖。制備出的多肽接枝羧甲基殼聚糖及其衍生物的生物材料能有效促進(jìn)成纖維細(xì)胞的生長及粘附，此外，膠原蛋白肽的引入還改善了羧甲基殼聚糖季銨鹽的抗氧化活性，避免了由于機(jī)體

2、表面創(chuàng)傷引起的自由基反應(yīng)造成的進(jìn)一步組織損傷，并且能夠促進(jìn)傷口愈合，縮短愈合時(shí)間，為開發(fā)新型創(chuàng)傷敷料奠定了基礎(chǔ)。制備的硫酸軟骨素接枝羧甲基殼聚糖材料能有效促進(jìn)成骨細(xì)胞生長，并賦予羧甲基殼聚糖抗凝血活性，為開發(fā)新型骨科材料奠定了理論基礎(chǔ)。本論文的主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　（1）以羧甲基殼聚糖為原料，水溶性的3-氯-2-羥丙基三甲基氯化銨為季銨陽離子化試劑制備羧甲基殼聚糖季銨鹽，再采用EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二

3、亞胺)和NHS(N-羥基琥珀酰亞胺)為交聯(lián)劑，在水相中制備羧甲基殼聚糖季銨鹽-膠原蛋白肽。通過單因素實(shí)驗(yàn)法，得到制備羧甲基殼聚糖季銨鹽-膠原蛋白肽的最優(yōu)條件為：膠原蛋白肽與羧甲基殼聚糖季銨鹽的質(zhì)量比為6.0，反應(yīng)溫度為40℃，反應(yīng)時(shí)間為16h。過氧化氫清除率實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著取代度的增大，過氧化氫清除率隨之增大；然而隨著濃度的增大和分子量的降低，過氧化氫清除率呈現(xiàn)出先增大后減小的趨勢(shì)，其中最適分子量為2.23×104。成纖維細(xì)胞存活率實(shí)

4、驗(yàn)結(jié)果表明，羧甲基殼聚糖季銨鹽-膠原蛋白肽能有效促進(jìn)成纖維細(xì)胞的生長，成纖維細(xì)胞存活率隨著取代度的增大而增大；然而隨著濃度的增大，成纖維細(xì)胞存活率呈現(xiàn)出先增大后減小的趨勢(shì)；成纖維細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)結(jié)果則表明，膠原蛋白多肽的引入改善了羧甲基殼聚糖對(duì)于成纖維細(xì)胞的粘附作用，并且成纖維細(xì)胞的粘附率隨著樣品取代度和濃度的增大而升高，呈明顯的正相關(guān)效應(yīng)。
　?。?）以EDC和NHS為交聯(lián)劑，制備羧甲基殼聚糖-硫酸軟骨素。通過單因素實(shí)驗(yàn)法，得到制備

5、羧甲基殼聚糖-硫酸軟骨素的最優(yōu)條件為：硫酸軟骨素與羧甲基殼聚糖質(zhì)量比為4.0：1，反應(yīng)溫度為35℃，反應(yīng)時(shí)間為24h?？鼓獙?shí)驗(yàn)結(jié)果表明，APTT、PT及TT隨著羧甲基殼聚糖-硫酸軟骨素取代度及濃度的增大而增大，對(duì)APTT的增強(qiáng)最為明顯，同時(shí)隨著分子量的變化而變化。對(duì)成骨細(xì)胞存活率實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，羧甲基殼聚糖-硫酸軟骨素能有效促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖與生長，并且細(xì)胞存活率隨著樣品取代度的增大而增大，與成骨細(xì)胞增殖呈正相關(guān)；然而隨著樣品濃度的增大

6、，成骨細(xì)胞的存活率先增大后減小。
　?。?）以EDC和NHS為交聯(lián)劑，制備羧甲基殼聚糖-GRGDY肽。通過單因素實(shí)驗(yàn)法，得到制備羧甲基殼聚糖-GRGDY肽的最優(yōu)條件為：羧甲基殼聚糖與GRGDY肽質(zhì)量比為10.0：1，反應(yīng)溫度為25℃，反應(yīng)時(shí)間為48h。成纖維細(xì)胞存活率實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，羧甲基殼聚糖-GRGDY肽能有效促進(jìn)成纖維細(xì)胞的生長，并且隨著樣品取代度和濃度的增大，成纖維細(xì)胞存活率也隨之增大，與成纖維細(xì)胞增殖呈正相關(guān)的關(guān)系。成纖維