DNA橋接的腫瘤靶向組裝型樹狀大分子的制備和研究.pdf

1、目的:利用互補(bǔ)單鏈DNA雜交技術(shù),設(shè)計(jì)制備葉酸受體介導(dǎo)靶向腫瘤細(xì)胞的熒光示蹤組裝型聚酰胺-胺樹狀大分子FA-ACE-PAMAM-DNA-PAMAM-ACE-FITC,并通過葉酸受體表達(dá)陽性的人體宮頸癌細(xì)胞株(Hela細(xì)胞株)的攝取實(shí)驗(yàn),初步驗(yàn)證其腫瘤細(xì)胞靶向性及游離葉酸對其靶向性的拮抗作用。
　　方法:先將第五代聚酰胺-胺樹狀大分子(G5 PAMAM dendrimer)部分?；?分兩組:一組與葉酸在偶聯(lián)劑的作用下形成連有葉酸的樹

2、狀大分子(PAMAM-ACE-FA),另一組與異硫氰酸熒光素( FITC)酰胺化生成異硫氰酸熒光素的樹狀大分子(PAMAM-ACE-FITC),兩組大分子再分別與經(jīng)水溶性碳二亞胺縮合劑(EDC)活化的互補(bǔ)單鏈DNA相連,最后利用DNA雜交原理,組裝具有熒光示蹤功能的葉酸受體介導(dǎo)組裝型聚酰胺-胺樹狀大分子FA-ACE-PAMAM-DNA-PAMAM-ACE-FITC。用熒光顯微鏡觀察Hela細(xì)胞攝取情況,考察FA-ACE-PAMAM-DN

3、A-PAMAM-ACE-FITC的葉酸受體介導(dǎo)的靶向性及游離葉酸對其靶向性的拮抗作用。
　　結(jié)果:(1)產(chǎn)物經(jīng)葡聚糖凝膠層析和純水透析純化至TLC已檢測不到游離FA及FITC后,UV掃描驗(yàn)證結(jié)果表明,PAMAM-ACE-FA和PAMAM-ACE-FITC制備成功。1H-NMR檢測結(jié)果,根據(jù)譜圖積分結(jié)果,平均每個PAMAM-ACE-FA約含4.1個FA,每個PAMAM-ACE-FITC約含5.0個FITC。(2)瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)

4、果表明,單鏈DNA成功連接至PAMAM-ACE-FA和PAMAM-ACE-FITC。通過電泳檢測和UV掃描,證明PAMAM-ACE-FA和PAMAM-ACE-FITC通過互補(bǔ)單鏈 DNA橋接組裝成為了FA-ACE-PAMAM-DNA-PAMAM-ACE-FITC。(4)在 Hela細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)中,經(jīng) DNA橋接形成的FA-ACE-PAMAM-DNA-PAMAM-ACE-FITC可以被細(xì)胞特異性攝取而產(chǎn)生熒光。
　　結(jié)論:本研究設(shè)計(jì)