萬古霉素高產(chǎn)菌種的推理選育及發(fā)酵工藝優(yōu)化.pdf

1、根據(jù)萬古霉素的生物合成途徑和代謝調(diào)節(jié)機理,對萬古霉素產(chǎn)生菌東方擬無枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)進行推理選育,旨在獲得高單位菌株.首先用正交試驗法優(yōu)化萬古霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基,與原培養(yǎng)基相比,優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基能使出發(fā)菌株A.orientalis 1-6的發(fā)酵單位提高21.5﹪.在此基礎上,以A.orientalis 1-6為出發(fā)菌株,經(jīng)過3次紫外線誘變,分別篩選0.5﹪乙酸鈉耐性突味株、0.7﹪磷酸氫二鈉耐性突

2、變株和萬古霉素耐性突變株,并結(jié)合自然分離純化,最終獲得高產(chǎn)突變株A.orientalis 7-9,其搖瓶發(fā)酵效價達4800u/ml,較出發(fā)菌株生產(chǎn)能力提高98﹪.傳代試驗表明,該變株的高產(chǎn)性能遺傳性較穩(wěn)定.通過發(fā)酵培養(yǎng)基成份的改進,A.orientalis 7-9的搖瓶發(fā)酵單位進一步提高了14.3﹪.從萬古霉素的搖瓶發(fā)酵著手,考察了無機鹽、溫度、種齡、溶氧、剪切力和可能的前體物質(zhì)對萬古霉素發(fā)酵的影響,結(jié)果表明:KH<,2>PO<,4>和