南方紅豆杉中紫杉醇產(chǎn)生菌的分離篩選與誘變選育研究.pdf

1、紫杉醇作為一種低毒、高效、廣譜的天然抗癌藥物，目前主要通過從紅豆杉中直接提取或經(jīng)化學(xué)半合成法制備得到。由于天然紅豆杉資源匱乏，導(dǎo)致紫杉醇供不應(yīng)求，價(jià)格極為昂貴。因此，采用各種手段以尋求紫杉醇新藥源生產(chǎn)途徑，并擴(kuò)大紫杉醇原料供應(yīng)能力，已成為紫杉醇產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重點(diǎn)研究方向之一。而產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌的發(fā)現(xiàn)，為生產(chǎn)紫杉醇提供了一種潛在的新途徑。
　　 本論文選取南方紅豆杉為植物材料，系統(tǒng)的開展南方紅豆杉內(nèi)生真菌的分離篩選工作，以期豐富紅豆杉

2、內(nèi)生真菌種群資源，從而尋找到更適合發(fā)酵生產(chǎn)紫杉醇的原始菌株。并對真菌發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行了抗腫瘤活性研究，同時(shí)對篩選到的產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌進(jìn)行了初步的誘變育種。
　　 使用組織塊法從采集的南方紅豆杉植物標(biāo)本中分離純化得到91株內(nèi)生真菌，并作了初步的鑒定分類。將分離得到的內(nèi)生真菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，對其發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行提取，經(jīng)以標(biāo)準(zhǔn)紫杉醇為對照的薄層層析（TLC）、紫外（UV）、高效液相色譜（HPLC）、質(zhì)譜（MS）分析，篩選到一株能夠生產(chǎn)紫杉醇的南

3、方紅豆杉內(nèi)生真菌D62，其紫杉醇產(chǎn)量為148.95μg/L。
　　 以HeLa細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)用癌細(xì)胞，采用體外細(xì)胞毒性測定法（MethylThiazolylTetrazolium，MTT）來研究內(nèi)生真菌D62發(fā)酵產(chǎn)物是否具有抗腫瘤細(xì)胞活性，結(jié)果表明其具有明顯的致腫瘤細(xì)胞凋亡作用。對菌株D62的菌落和菌絲體的形態(tài)學(xué)分析表明其為鐮刀屬（Fusariumsp.）。
　　 采用紫外照射（25w、30cm）80s的條件對菌株D62進(jìn)