MDR1基因多態(tài)性對富馬酸盧帕他定吸收影響的機制研究.pdf

1、背景：
　　 富馬酸盧帕他定為新型、強效的組胺H1受體及血小板活化因子(PAF)受體雙重拮抗劑，該藥口服生物利用度低，且吸收程度存在較大的個體差異。由MDR1基因編碼的外排轉(zhuǎn)運體P-gp對已吸收藥物的主動外排可能是導致富馬酸盧帕他定體內(nèi)生物利用度低，個體差異大的主要原因。本課題通過體外模型探討富馬酸盧帕他定基于P-gp介導的外排機制，再進一步研究MDR1基因多態(tài)性對富馬酸盧帕他定體內(nèi)吸收的影響，探討富馬酸盧帕他定人體口服吸收存在

2、個體差異的緣由，對指導富馬酸盧帕他定個體化用藥有重要的臨床意義。
　　 目的：
　　 本課題通過建立Caco-2單層細胞模型研究P-gp對富馬酸盧帕他定吸收的影響，在此基礎(chǔ)上進一步探討P-gp編碼基因MDR1基因多態(tài)性對富馬酸盧帕他定在中國健康人體藥代動力學特征的影響，為RUP的個體化合理用藥及臨床療效評估提供理論參考依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.建立并評價Caco-2單層細胞模型特征，用以體外試驗探究

3、P-gp對富馬酸盧帕他定吸收的影響。
　　 2.通過雙向轉(zhuǎn)運試驗了解富馬酸盧帕他定在Caco-2單層細胞模型上的轉(zhuǎn)運特性，比較P-gp抑制劑維拉帕米存在與否時，盧帕他定跨Caco-2細胞膜轉(zhuǎn)運的不同之處，探究富馬酸盧帕他定在Caco-2細胞細胞模型上的轉(zhuǎn)運是否被P-gp所介導。
　　 3.在探明富馬酸盧帕他定是P-gp的底物的基礎(chǔ)上，采用PCR-RFLP方法對22名中國漢族健康志愿者進行全血MDR1 C3435T基因分型

4、，而后展開富馬酸盧帕他定藥代動力學試驗，采集系列血樣，利用HPLC-MS/MS方法測定血藥濃度。
　　 4.采用DAS2.1軟件計算富馬酸盧帕他定健康人體藥代動力學參數(shù)，采用方差分析和獨立樣本t檢驗比較不同基因型組(MDR1C3435C、MDR1C3435T、MDR1T3435T)之間的主要藥代動力學參數(shù)的差異。
　　 結(jié)果：
　　 1.Caco-2細胞生長情況良好，分布均勻，邊界清晰。培養(yǎng)22～25后TEER值

5、>500Ω·cm2，且Caco-2細胞出現(xiàn)了明顯的極化現(xiàn)象；在5～40μM濃度范圍內(nèi)，Caco-2細胞對富馬酸盧帕他定攝取量呈線性，20min內(nèi)攝取量逐漸上升，而后趨于穩(wěn)態(tài)；PH為7.4時，Caco-2細胞的攝取量最大；所建立的Caco-2細胞單層模型符合小腸特征，可用于下一步的轉(zhuǎn)運抑制試驗。
　　 2.通過在Caco-2細胞單層模型上的雙向轉(zhuǎn)運試驗，結(jié)果表明富馬酸盧帕他定的轉(zhuǎn)運有明顯的方向性，提示可能受到某種外排作用的影響，因

6、而加入P-gp專屬性抑制劑維拉帕米探討富馬酸盧帕他定在跨膜轉(zhuǎn)運過程中是否受到P-gp介導，結(jié)果表明，加入P-gp抑制劑維拉帕米后，富馬酸盧帕他定在Caco-2單層細胞轉(zhuǎn)運模型中的表觀滲透系數(shù)發(fā)生顯著改變，表觀滲透率由5.426下降至1.339，結(jié)果提示富馬酸盧帕他定很有可能是P-gp的底物。
　　 3.P-gp的表達和功能受編碼基因MDR1 C3435T位點調(diào)控，通過PCR-RFLP法對健康受試者進行全血基因分型，22名受試者M

7、DR1 C3435T基因分型結(jié)果：MDR1 C3435C基因型(簡稱CC型)10人，MDR1 C3435T基因型(簡稱CT型)9人，MDR1 T3435T(簡稱TT型)3人，該基因分布頻率與文獻中報道的中國人群中MDR1 C3435T突變率接近，滿足研究分析的樣本類型。
　　 4.三種不同基因型受試者的主要藥代動力學參數(shù)的差異具有統(tǒng)計學意義：CC、CT、TT、型組的Cmax分別為18.91±7.20 ug/L、14.90±6.0

8、4 ug/L和12.52±7.49ug/L、TT型組的Cmax顯著低于CC、CT型組。AUC0-t和AUC0-∞在TT型組中也顯著低于CC、CT型組，TT型組的AUC0-t和AUC0-∞分別為(29.72±24.79ug/L*h、31.01±25.74 ug/L*h)，CC和CT型組的AUC0-t和AUC0-∞分別為(47.46±15.02 ug/L*h、49.88±16.42 ug/L*h)和(49.30±14.22 ug/L*h、5

9、1.73±15.64 ug/L*h)TT型組的Tmax(0.58±0.14h)也顯著低于CC型組(0.83±0.29h)和CT型組(1.11±0.22h)而TT型的CLz(468.45±264.42 L/h)略高于CC型組(234.36±130.38 L/h)和CT型組(206.53±50.05 L/h)，但差異無統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)論：
　　 本研究建立了符合藥物轉(zhuǎn)運試驗的Caco-2細胞單層模型，通過雙向轉(zhuǎn)運實驗表

10、明富馬酸盧帕他定跨膜轉(zhuǎn)運具有顯著地方向性，加入P-gp抑制劑維拉帕米后，顯著地抑制P-gp對富馬酸盧帕他定的外排作用，提示富馬酸盧帕他定可能是P-gp的底物。P-gp的編碼基因MDR1 C3435T位點的突變對富馬酸盧帕他定在健康人體內(nèi)的吸收影響顯著；MDR1 T3435T型個體對RUP的吸收顯著低于MDR1 C3435T型和MDR1 C3435C型(P<0.01)，MDRlT3435T對富馬酸盧帕他定在中國人體內(nèi)的藥代動力學的吸收過程