HBx蛋白調(diào)節(jié)大鼠肝干細胞分化作用的研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是我國最常見的惡性腫瘤之一，我國發(fā)病約占全世界發(fā)病的45％左右，而且預后不良，嚴重威脅著人類的生命健康。近年來，隨著診斷、治療技術(shù)的進步，多種手段的綜合治療措施已經(jīng)較大地改善了肝癌患者的生存質(zhì)量，但其治愈率及生存率依然不能令人滿意，肝癌的復發(fā)和轉(zhuǎn)移仍然是影響患者生存期的重要因素。細胞生物學及分子生物學的巨大進步為研究和探討肝癌的起源、復發(fā)及轉(zhuǎn)移提供了重要的手段，目前，

2、我們已能夠從基因水平、蛋白水平直至細胞水平等各個層次和角度來認識肝癌的起源、復發(fā)及轉(zhuǎn)移，為臨床治療肝癌提供了重要的理論基礎(chǔ)，盡管如此，我們依然缺乏對肝癌各種生物學行為更加系統(tǒng)的認識以及為指導臨床治療肝癌提供更加具有針對性和有效的治療措施。因此，研究原發(fā)性肝癌的發(fā)生發(fā)展規(guī)律以指導診斷治療一直是科研工作者們孜孜以求的目標。
　　現(xiàn)在認為，原發(fā)性肝癌的發(fā)生與一些存在肝硬化的慢性肝病密切相關(guān)，是一個多因素、多階段、多基因共同的積累過程。關(guān)

3、于細胞癌變存在兩種假說：（1）癌變是由已分化成熟的細胞去分化（退化）而引起；（2）癌變是干細胞在分化過程中受阻滯（異常分化）而引起。
　　乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)的慢性感染與HCC之間存在著密切的聯(lián)系，然而HBV誘發(fā)HCC的確切機制仍不十分清楚。有研究表明，乙肝病毒X基因及其編碼的X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)在HCC的發(fā)生中起著重要的作用。為進一步探討HBV

4、X基因在與HBV相關(guān)HCC發(fā)生中的作用，我們將在我科已經(jīng)成功分離、純化、培養(yǎng)大鼠肝干細胞的基礎(chǔ)上，從HBV這一導致HCC發(fā)生的重要危險因素入手，以病毒HBVX基因以及其產(chǎn)物HBx蛋白作為對象，通過轉(zhuǎn)染HBVX基因到大鼠肝干細胞，分析在肝干細胞分化過程中，HBx蛋白對其的影響，觀察表達蛋白及細胞表面分子變化，進一步了解肝干細胞分化受阻的機理。
　　為此，我們構(gòu)建了帶有綠色熒光蛋白的質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染至大鼠肝干細胞中，通過細胞生長曲線、細胞分

5、泌蛋白等變化，觀察轉(zhuǎn)染后的大鼠肝干細胞的生長情況；在裸鼠皮下注射轉(zhuǎn)染HBVX基因的、轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒及正常大鼠肝干細胞，觀察成瘤率及腫瘤的生長情況，探討在體內(nèi)實驗中HBVX基因在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用。
　　我們首先成功的構(gòu)建了質(zhì)粒，為帶有增強型綠色熒光蛋白報告基因HBVX基因的質(zhì)粒PIRES2-EGFP-HBx。將構(gòu)建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至大鼠肝干細胞中，我們發(fā)現(xiàn)攜帶HBx的大鼠肝干細胞盡管生長速度和大鼠肝干細胞無明顯差異，但在分化過程中產(chǎn)

6、生的分化細胞合成白蛋白、尿素氮的能力下降，大量表達甲胎蛋白，逐步遠離肝細胞特征。
　　轉(zhuǎn)染HBVX基因、轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒及正常大鼠肝干細胞在裸鼠體內(nèi)成瘤能力變化的實驗結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染HBVX基因組的裸鼠局部形成腫瘤，說明攜帶HBVX基因，表達HBx蛋白的大鼠肝干細胞在分化過程中，致瘤能力增強。
　　以上結(jié)果提示轉(zhuǎn)染HBVX基因的大鼠肝干細胞在分化過程中，受到HBVX基因的調(diào)控，不能向肝細胞或者膽管上皮細胞分化，而是增加惡性致瘤能力，