宮內(nèi)膜干細胞的成肝分化及其對肝損傷修復作用的研究.pdf

1、本研究目的為探討宮內(nèi)膜干細胞的體外成肝誘導分化及其在肝臟損傷中發(fā)揮的修復作用。首先，我們從招募的志愿者經(jīng)血中分離出單個核細胞進行體外傳代培養(yǎng)并對獲得的細胞進行間充質(zhì)干細胞鑒定。宮內(nèi)膜干細胞不具有致瘤性，可以呈單層貼壁生長，可以24小時倍增一次，為典型的棒狀或長梭狀的成纖維細胞樣細胞。流式細胞術(shù)分析這類細胞均表達CD44，CD73，CD90,和CD29，而不表達CD117，CD34，CD45，和HLA-DR。宮內(nèi)膜干細胞在體外可以被誘導分

2、化為成骨細胞和成脂細胞。
　　 其次，我們研究了宮內(nèi)膜干細胞的體外成肝誘導分化能力。宮內(nèi)膜干細胞在與HGF、FGF4、OSM以及DEX等共培養(yǎng)后，逐漸向上皮細胞樣細胞形態(tài)變化。誘導分化后的細胞能夠表達ALB和AFP蛋白，以及基因ALB、AFP、CK18、CK19、CYP1A1和CYP3A4等。表達譜芯片分析可見分化后的細胞能表達33個肝臟相關(guān)基因，這些基因在原代肝臟細胞中表達，而宮內(nèi)膜干細胞中則不表達。另外，誘導分化后細胞功能驗

3、證顯示，其具有糖原合成、ICG排泌和尿素合成功能等。這些數(shù)據(jù)可以初步證實，所誘導的細胞是具有肝細胞表型且能發(fā)揮部分肝臟細胞功能的較成熟的細胞。
　　 最后，為了驗證移植細胞能否參與肝損傷修復過程，小鼠肝臟部分切除后，分別移植宮內(nèi)膜干細胞和誘導分化后細胞，移植后10天，移植分化組小鼠肝功能較移植宮內(nèi)膜干細胞組恢復明顯，具有顯著性差異。移植8周后，在小鼠肝臟中可以檢測到移植細胞的存在，并且移植宮內(nèi)膜干細胞在受體肝臟內(nèi)發(fā)生分化。Fah