鞘磷脂和硫苷脂的鳥槍法脂質組學分析及其應用.pdf

1、本文主要分為四個部分。第一部分以小鼠大腦為分析樣本，建立直接進樣電噴霧串聯(lián)質譜測定鞘磷脂和硫苷脂的分析方法。第二部分以小鼠大腦為分析樣本，建立流動注射電噴霧串聯(lián)質譜測定鞘磷脂和硫苷脂的分析方法。第三部分對直接進樣電噴霧串聯(lián)質譜和流動注射電噴霧串聯(lián)質譜測定鞘磷脂和硫苷脂的兩種分析方法進行比較。第四部分利用直接進樣電噴霧串聯(lián)質譜法測定了三種動物腦組織（雞腦、鴨腦、豬腦）中鞘磷脂和硫苷脂含量，研究了不同儲藏溫度下豬腦組織中鞘磷脂和硫苷脂的變化

2、;利用流動注射電噴霧串聯(lián)質譜法研究了硒對小鼠血漿中鞘磷脂的影響。
　　 首先，本文以小鼠大腦為分析樣本對鞘磷脂和硫苷脂的提取方法、樣品的進樣速度、鞘磷脂和硫苷脂掃描模式的選擇以及串聯(lián)質譜參數(shù)等進行優(yōu)化，建立直接進樣電噴霧串聯(lián)質譜測定鞘磷脂和硫苷脂的方法，并對該方法的線性關系、提取回收率、日內精密度及日間精密度進行了考察。最終選擇改良的BlighDyer法結合氫氧化鈉甲醇提取鞘脂，采用流動注射泵直接進樣的方式以5μL/min的進樣

3、速度將樣品導入電噴霧離子源，利用串聯(lián)三重四級質譜的子找母掃描功能，掃描鞘磷脂和硫苷脂的特征性子離子，實現(xiàn)對鞘磷脂和硫苷脂的源內分離和鑒定。方法學評價顯示:在5-2000ng/mL的線性范圍內具有良好的線性關系(R2分別為0.9967和0.9913)，其精密度（均小于8.72％）和回收率(88.7～107.8％)均符合分析要求，本方法具有前處理較簡單，特異性強，靈敏度高，定性和定量快速準確，方法穩(wěn)定等特點，可滿足生物樣品中鞘磷脂和硫苷脂檢

4、測的需要。
　　 其次，本文以小鼠大腦為分析樣品，對樣品的進樣速度、進樣量、流動相、串聯(lián)質譜參數(shù)等相關參數(shù)進行了選擇優(yōu)化，建立了流動注射電噴霧串聯(lián)質譜測定鞘磷脂和硫苷脂的方法，并對該方法的線性關系、提取回收率、日內精密度及日間精密度進行了考察。最終，腦組織樣品經(jīng)改良的BlighDyer法結合氫氧化鈉甲醇處理后提取鞘脂，在直接進樣電噴霧串聯(lián)質譜定性的基礎上，分別以含0.1％甲酸的甲醇溶液和純甲醇溶液作為流動相將樣品采用流動注射泵直

5、接進樣的方式以0.15mL/min的進樣速度導入電噴霧離子源，利用串聯(lián)三重四級質譜的多離子反應監(jiān)測模式掃描，實現(xiàn)對鞘磷脂和硫苷脂源內分離和鑒定。方法學評價顯示:在5-2000ng/mL的線性范圍內具有良好的線性關系(R2分別為0.9954和0.9972)，其精密度（均小于8.21％）和回收率(87.3～103.2％)均符合分析要求，本方法具有自動化程度高，定性定量準確且方法穩(wěn)定，前處理較簡單，特異性強，分析速度快等特點，可滿足生物樣品中

6、鞘磷脂和硫苷脂分析的需要。
　　 再次，本文對前期建立的兩種測定鞘磷脂和硫苷脂的電噴霧串聯(lián)質譜方法進行比較，發(fā)現(xiàn)這兩種方法在儀器配備和自動化程度上略有差別，但兩者靈敏度和準確性都較高，操作簡便，特異性強，因此兩種方法都適合分析生物樣本中鞘磷脂和硫苷脂的含量。
　　 最后，將兩種方法分別應用于實際樣品的檢測。直接進樣電噴霧串聯(lián)質譜法測定三種動物腦組織（雞腦、鴨腦、豬腦）中鞘磷脂和硫苷脂的含量中發(fā)現(xiàn)，三種動物腦組織鞘磷脂和硫

7、苷脂分子種成分接近，但是相對含量有所差別，同屬禽類腦的雞腦和鴨腦鞘磷脂和硫苷脂分子種相對含量相近，而與屬畜類腦的豬腦有所差別，這些差別有望用于不同動物腦組織來源的鑒定。直接進樣電噴霧串聯(lián)質譜法研究豬腦組織在不同儲藏過程（+20℃，+4℃和-20℃溫度下分別儲藏36h，7d和60d）中，鞘磷脂和硫苷脂含量的變化過程中發(fā)現(xiàn)，鞘磷脂和硫苷脂含量基本上呈現(xiàn)逐漸上升，再緩慢減少，最后趨于穩(wěn)定的趨勢。+4℃儲藏條件下，鞘磷脂和硫苷脂的氧化和水解速度