GPX2在食管癌中的表達(dá)及其預(yù)后意義.pdf

1、背景和目的：
　　谷胱甘肽過氧化物酶2（glutathione peroxidase2，GPX2）又稱為胃腸特異型谷胱甘肽過氧化物酶，主要表達(dá)于胃腸道，在人類還表達(dá)于食管和肝臟，其基本功能是抗氧化損傷。目前研究發(fā)現(xiàn)，GPX2在結(jié)直腸癌、Barrett’s食管、鱗狀上皮細(xì)胞致瘤性轉(zhuǎn)化、肺癌、肝癌，乳腺癌和雄激素依賴性前列腺癌等腫瘤中高表達(dá)，關(guān)于GPX2表達(dá)與腫瘤之間關(guān)系的研究方興未艾。然而，GPX2在食管癌中的表達(dá)，及其與食管癌發(fā)生

2、發(fā)展之間的關(guān)系以及在食管癌形成過程中所發(fā)揮的作用卻鮮有報(bào)道。
　　食管癌是最常見的消化道惡性腫瘤之一，在世界范圍內(nèi)，是第八大常見腫瘤，第六大癌癥致死原因。在我國，廣東省潮汕地區(qū)是食管癌高發(fā)區(qū)之一，其嚴(yán)重威脅了當(dāng)?shù)鼐用竦慕】蹬c生命。本研究主要采用HE染色、免疫組織化學(xué)、細(xì)胞培養(yǎng)、Western blot和RT-PCR等實(shí)驗(yàn)方法。通過檢測GPX2在正常食管粘膜上皮細(xì)胞系中的表達(dá)，探討硒對GPX2表達(dá)的影響；通過檢測GPX2和8-Ohd

3、G在食管癌和食管粘膜組織中的表達(dá)，探討GPX2與食管癌發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系及其在食管癌形成過程中所發(fā)揮的作用；本研究還探討了GPX2的表達(dá)對食管癌患者預(yù)后的影響。
　　材料與方法：
　　材料：
　　收集汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理科2002年及2011-2012年間165例術(shù)前未經(jīng)放化療食管癌患者的手術(shù)標(biāo)本，其中隨訪85例食管癌患者，還有70例食管癌患者手術(shù)標(biāo)本配有癌旁食管粘膜組織。此70例食管癌患者手術(shù)配對標(biāo)本均在腫瘤、腫瘤旁粘

4、膜(距腫瘤2厘米內(nèi))及遠(yuǎn)端切緣粘膜（距腫瘤5厘米外）等三處取材，分別標(biāo)記為Ca、P、N。故P和N組織標(biāo)本共140例，除去8例賁門部位粘膜，實(shí)際統(tǒng)計(jì)為132例。
　　收集汕頭大學(xué)司法鑒定中心尸檢取材獲得的正常食管粘膜標(biāo)本6例，其中取自嬰兒和成人各3例。
　　NE3正常食管上皮永生化細(xì)胞系為香港大學(xué)曹教授惠贈(zèng)。
　　方法：
　　1.HE染色：觀察食管癌的組織學(xué)類型、分化程度、浸潤深度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等情況,觀察食管癌癌

5、旁粘膜和遠(yuǎn)端切緣粘膜組織學(xué)類型及炎癥細(xì)胞浸潤程度等情況。
　　2.免疫組化染色：采用Envision兩步法檢測食管癌、癌旁粘膜及遠(yuǎn)端切緣粘膜中GPX2蛋白和8-OhdG的表達(dá)。
　　3.細(xì)胞培養(yǎng)：培養(yǎng)NE3正常食管粘膜上皮永生化細(xì)胞系，建立硒模型。
　　4.Western blot：檢測食管癌、癌旁粘膜及遠(yuǎn)端切緣粘膜新鮮組織標(biāo)本GPX2的表達(dá)情況。
　　5.RT-PCR：檢測食管癌、癌旁粘膜及遠(yuǎn)端切緣粘膜新鮮組織

6、標(biāo)本GPX2 mRNA的表達(dá)情況。
　　6.圖像采集：使用Leica DMRXA2全能顯微鏡和Leica IM50圖像采集系統(tǒng)對染色結(jié)果進(jìn)行拍照分析。
　　7.統(tǒng)計(jì)分析：利用SPSS19.0對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用了?2檢驗(yàn)、相關(guān)分析、Log-rank檢驗(yàn)，趨勢檢驗(yàn)和Cox回歸模型等方法。P值＜0.05時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.炎癥等級與食管粘膜上皮異常增生之間存在正相關(guān)（P=0.000，P＜0.

7、01），Spearman相關(guān)系數(shù)r=0.640。
　　2.隨正常食管粘膜、食管上皮異常增生到食管癌的過程中，8-OhdG的表達(dá)逐漸增加。
　　3.隨硒濃度的增加，GPX2的表達(dá)明顯增加。
　　4.隨正常食管粘膜、食管上皮異常增生到食管癌的過程中，GPX2的表達(dá)逐漸增加。而在低分化型的食管癌中，GPX2呈陰性表達(dá)。
　　5.GPX2表達(dá)是食管癌患者能否長期生存的獨(dú)立影響因素，也是食管癌的死亡危險(xiǎn)因素，GPX2陰性表