γ-H2AX與周期蛋白在食管癌中的表達及其預后意義.pdf

1、背景與目的：
　　食管癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一，其中50％以上的新發(fā)病例發(fā)生在我國，目前我國已是全球食管癌發(fā)病率和死亡率最高的國家，且患者的5年生存率不到10%。腫瘤的發(fā)生常伴隨著DNA損傷，其中雙鏈損傷是最嚴重的類型之一，目前γ-H2AX被看作是DNA雙鏈損傷一個標志性的蛋白，且在雙鏈損傷修復過程當中起到重要的連接作用，參與啟動DNA修復反應。此外腫瘤也被認為是一種細胞周期疾病，細胞生長周期的失調與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有直接關系

2、。CyclinDl為G1期細胞周期素，其表達一旦失控，將會引起細胞增殖周期失調，從而引起腫瘤的發(fā)生。PCNA在G1期開始增加，至S期達到高峰，參與DNA的合成并在細胞周期中起重要的調控作用。CyclinB1是控制細胞進入G2/M期的關鍵因子，在G2晚期達到峰值。人類腫瘤中存在DNA損傷已經被證實，但至今關于DNA雙鏈損傷與細胞周期之間關系的研究甚少。本課題主要研究γ-H2AX與細胞周期蛋白（CyclinD1、PCNA、CyclinB1）

3、之間的關系，探討它們在食管癌發(fā)生發(fā)展中的作用，為更好地指導臨床診斷與治療預后提供理論與實驗依據。
　　材料和方法：
　　1.實驗標本86例無放化療史的食管癌組織標本，12例上皮內瘤變組織標本、39例遠端正常粘膜組織標本。并整理86例患者臨床相關病理資料和34例患者隨訪情況資料。
　　2. HE染色觀察食管癌、上皮內瘤變及遠端正常粘膜標本的組織學形態(tài)。
　　3.免疫組織化學染色應用Envision兩步法分別檢測γ-

4、H2AX、CyclinD1、PCNA和CyclinB1在食管組織中的表達。
　　4.細胞免疫熒光染色檢測食管癌細胞系EC1中γ-H2AX與CyclinB1的共表達情況。
　　5.圖像分析法用Leica IM50圖像采集系統(tǒng)和Image-Pro Plus6.0圖像分析系統(tǒng)對染色結果進行分析。
　　6.統(tǒng)計分析應用SPSS19.0統(tǒng)計軟件對數據進行統(tǒng)計學分析，采用卡方檢驗統(tǒng)計分析它們的陽性表達與食管癌各臨床病理特征的關系，

5、Kaplan-Meier法比較組間生存時間的差別，生存時間比較采用Log-rank test。P<0.05認為有統(tǒng)計學意義，P<0.01有高度統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1.食管癌組γ-H2AX的陽性表達率為68.6%（59/86），稍高于EIN組的陽性表達率66.7%（8/12），且兩者明顯高于遠端粘膜組12.8%（5/39），三者比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。食管癌組CyclinB1的陽性表達率為74.4%（6

6、4/86），高于EIN組的陽性表達率66.7%（8/12）及遠端粘膜組35.9%（14/39），三者比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　2.γ-H2AX蛋白表達減少與食管癌的TNM分期、淋巴結轉移有關（P<0.05）；CyclinD1、PCNA蛋白表達的增強與食管癌TNM分期、淋巴結轉移顯著相關（P<0.05）；CyclinB1蛋白的表達與臨床各病理參數均無明顯相關。
　　3.在食管癌組織中，γ-H2AX的表達與Cy

7、clinB1的表達之間呈正相關性(r=0.235，P=0.029)，γ-H2AX的表達與CyclinD1及PCNA的表達之間無明顯相關關系。
　　4. Kaplan-Meier生存分析發(fā)現，單獨檢測γ-H2AX、CyclinD1、PCNA及CyclinB1等蛋白的表達情況對食管癌患者的生存率的影響無統(tǒng)計學意義；但聯(lián)合檢測γ-H2AX、CyclinB1蛋白陽性表達組的生存率高于陰性表達組，其差別具有統(tǒng)計學意義（Log-rank te