橋本甲狀腺炎患者殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體與人類白細(xì)胞抗原基因?qū)︻l率的分析.pdf

1、研究背景:
　　殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體(Killer cell immunoglobulin-like receptor,KIR)主要表達(dá)于自然殺傷細(xì)胞(Natural killer,NK)和部分T細(xì)胞表面，通過特異性識別靶細(xì)胞表面人類白細(xì)胞抗原(Human leukocyte antigen，HLA)，調(diào)控NK細(xì)胞和T細(xì)胞的免疫活性。HLA-C屬于經(jīng)典的HLA-I類分子，廣泛分布于有核細(xì)胞表面，根據(jù)第80位氨基酸的不同，可將H

2、LA-C分為HLA-C1(Asn80)和HLA-C2(Lys80)兩組。HLA-C1組包括HLA-Cw01、Cw03、Cw07、Cw08，特異性識別KIR2DL2/3和KIR2DS2;HLA-C2組包括HLA-Cw02、Cw04、Cw05、Cw06，特異性識別KIR2DL1和KIR2DS1。兩組HLA-C配體分別與不同的KIR受體結(jié)合，影響機(jī)體自身的免疫穩(wěn)態(tài)，導(dǎo)致疾病的發(fā)生。橋本甲狀腺炎(Hashimoto's thyroiditis，

3、HT)是自身免疫甲狀腺病的一種，其發(fā)病機(jī)制可能與HT患者體內(nèi)NK細(xì)胞和T細(xì)胞的免疫功能紊亂有關(guān)，但是具體機(jī)制尚未完全闡明。
　　目的:
　　在以往研究的基礎(chǔ)上，用序列特異性引物PCR(sequence specific primer polymerase chain reaction，PCR-SSP)方法進(jìn)一步分析KIR/HLA受體配體基因?qū)Φ姆植技捌渑cHT發(fā)病間的關(guān)聯(lián)性。
　　方法:
　　1.研究對象HT組選擇

4、2012年10月至2013年3月就診于山東省立醫(yī)院的山東地區(qū)橋本甲狀腺炎患者88例，患者全部存在彌漫性甲狀腺腫大，經(jīng)甲狀腺穿刺細(xì)胞學(xué)檢查、甲狀腺B超及甲狀腺過氧化物酶抗體(TPOAb)和甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)檢測確診為HT，并排除其他甲狀腺及自身免疫性疾病。對照組為同期同地區(qū)無血緣關(guān)系的隨機(jī)健康個(gè)體86例，均排除甲狀腺疾病、自身免疫性疾病及相關(guān)家族病病史。HT患者組與對照組的年齡、性別分布經(jīng)檢驗(yàn)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.基因分

5、型分析空腹抽取外周靜脈血，ACD抗凝，用氯仿、飽和酚法提取DNA。用序列特異性引物PCR方法進(jìn)行KIR基因分型。測定的KIR基因包括抑制性KIR:KIR2DL1、KIR2DL2/3，活化性KIR:KIR2DS1、KIR2DS2以及框架基因KIR2DL4。每一個(gè)DNA模版的PCR擴(kuò)增反應(yīng)，以框架基因KIR2DL4作為PCR反應(yīng)效率的內(nèi)參照。用序列特異性引物PCR方法進(jìn)行HLA-C基因分型。測定的HLA-C基因?yàn)镠LA-Cw01-Cw08。

6、
　　3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS18.0軟件包處理，患者組與對照組之間KIR/HLA-C基因?qū)︻l率顯著性差異采用四格表卡方檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.KIR/HLA-C基因?qū)︻l率在兩組間的比較分別比較HT患者組和健康對照組KIR2DL1+HLA-C2、KIR2DL2/3+HLA-C1、KIR2DS1+HLA-C2和KIR2DS2+HLA-C1四對KIR/HLA-C基因?qū)Φ念l率，四對基因?qū)?/p>

7、均以不同頻率表達(dá)，與對照組相比，HT患者組外周血中KIR2DS2+HLA-C1基因?qū)︻l率顯著升高(36.36％vs15.12％，p＜0.001)，其余3對基因?qū)IR2DL1+HLA-C2、KIR2DL2/3+HLA-C1和KIR2DS1+HLA-C2在HT組和對照組頻率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.各HLA-C基因頻率在兩組間的比較分別比較HLA-C1(HLA-Cw02、04、05、06)和HLA-C2(HLA-Cw01、03、

8、07、08)兩組HLA-C基因，兩組HLA-C基因在外周血中呈不平衡表達(dá)，其中，HLA-Cw03和HLA-Cw08基因在HT患者中頻率較健康對照者減低，兩組相比差異有顯著性(15.91％vs40.70％，26.14％vs47.67％，P均＜0.05)。但是總的HLA-C1和HLA-C2頻率在兩組間無顯著性差異。
　　3.分別測得KIR2DL2/3/HLA-C1受體配體基因組合在其相應(yīng)刺激KIR2DS2缺失的基因型頻率在橋本甲狀腺炎

9、患者明顯低于健康對照者，并且提示KIR2DL2/3比KIR2DS2對橋本甲狀腺炎的發(fā)病具有保護(hù)作用。
　　結(jié)論與意義:
　　本研究結(jié)果顯示，與健康人群相比，HT患者外周血活化性KIR2DS2/HLA-C1基因?qū)︻l率增加，可能通過影響活化性與抑制性KIR/HLA-C受配體對之間的平衡，使NK/T細(xì)胞的激活閾值下降，易于被自身抗原激活，破壞機(jī)體的免疫穩(wěn)定狀態(tài)，異常激活的NK/T細(xì)胞可直接殺傷自身甲狀腺細(xì)胞造成甲狀腺組織過度破壞，