1、Omentin-1對人成骨細胞增殖的作用及機制研究2、Ghrelin對OPG基因敲除小鼠動脈鈣化的影響.pdf

1、第一部分Omentin-1對人成骨細胞增殖的作用及機制研究
　　目的:網(wǎng)膜素(Omentin-1)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種主要由網(wǎng)膜脂肪組織分泌的脂肪因子，研究表明Omentin-1參與調(diào)控胰島素敏感性、心血管功能、炎癥反應及骨代謝等生理過程。我們近期的研究發(fā)現(xiàn)Omentin-1在護骨素(OPG)基因敲除或卵巢切除的小鼠中通過調(diào)控成骨細胞增殖和分化發(fā)揮骨保護作用。但是關(guān)于Omentin-1對人成骨細胞(hOB)增殖的作用及相關(guān)機制的研究

2、仍較少，本研究旨在檢測Omentin-1對hOB增殖的影響及信號轉(zhuǎn)導機制。
　　方法:原代hOB取材于人的松質(zhì)骨，用不同濃度Omentin-1(25，50，100，200ng/ml)干預48h，用[3H]胸腺嘧啶核苷酸摻入法評價細胞增殖的水平;Western Blot檢測磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)下游底物Akt的活化;通過小分子干擾核糖核酸(siRNA)技術(shù)阻斷Akt，聯(lián)合PI3K信號轉(zhuǎn)導阻斷劑LY294002和Akt信號轉(zhuǎn)導阻

3、斷劑HIMO干預hOB后，觀察Omentin-1對hOB增殖及信號轉(zhuǎn)導機制的影響。
　　結(jié)果:25～200ng/ml Omentin-1能促進hOB增殖，且呈濃度依賴效應，Omentin-1濃度為200ng/ml時，促進細胞增殖呈最大效應;Omentin-1能誘導Akt的活化，將Akt-siRNA轉(zhuǎn)染至hOB后可阻斷Akt蛋白的表達;此外，Akt-siRNA, LY294002和HIMO均可阻斷Omentin-1的促成骨細胞增殖的

4、效應。
　　結(jié)論: Omentin-1能通過PI3K/Akt信號通路促進hOB增殖。
　　第二部分Ghrelin對OPG基因敲除小鼠動脈鈣化的影響
　　目的:Ghrelin是一種由28個氨基酸組成的多肽，在體內(nèi)發(fā)揮著促進生長激素釋放，刺激攝食，調(diào)節(jié)能量代謝等方面的作用。血管平滑肌細胞(VSMCs)向成骨樣細胞分化是動脈鈣化的細胞學基礎(chǔ)和關(guān)鍵環(huán)節(jié)。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)Ghrelin通過細胞外信號調(diào)節(jié)激酶/細胞核因子κB受體

5、活化因子配基(ERK/RANKL)和Akt/RANKL信號通路抑制小鼠VSMCs向成骨樣細胞分化，本研究探討Ghrelin對OPG基因敲除(OPG-/-)小鼠動脈鈣化的影響。
　　方法:OPG-/-小鼠每兩周經(jīng)尾靜脈注射Ghrelin adenovirus(Ad-Ghr)或β-galactosidase adenovirus(Ad-Gal)或PBS，并分別分為Ghrelin組、陰性對照組及空白對照組，野生型(WT)小鼠每兩周經(jīng)尾靜

6、脈注射PBS作為WT組，8周后處死老鼠，分離鼠胸主動脈，western blot檢測Ghrelin表達;茜素紅染色及Vonkossa染色測定血管的鈣化程度;分離主動脈弓到髂骨分支的動脈，比色法測動脈血管壁鈣含量，對硝基苯酚法測動脈血管壁堿性磷酸酶(ALP)活性;免疫組化檢測動脈血管壁骨鈣素(OC)、RANKL及Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2(RUNX2)的表達。
　　結(jié)果:Ghrelin組小鼠Ghrelin的表達較其余三組的明顯升高，說明

7、Ghrelin腺病毒載體使小鼠成功過表達Ghrelin;茜素紅和Vonkossa鈣化染色均顯示W(wǎng)T組小鼠未見明顯鈣化，Ghrelin組小鼠動脈僅出現(xiàn)輕度鈣化，陰性對照組和空白對照組動脈出現(xiàn)明顯鈣化;與WT小鼠相比，OPG-/-小鼠主動脈血管壁鈣含量及ALP活性明顯升高，Ghrelin組小鼠動脈血管壁的鈣含量及ALP活性較陰性對照組和空白對照組的明顯降低。免疫組化提示與WT小鼠相比，OPG-/-小鼠動脈血管壁的OC、RANKL、RUNX2