地塞米松、辛伐他汀對(duì)小鼠成骨細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子和細(xì)胞增殖作用的影響.pdf

1、第一部分 地塞米松對(duì)小鼠骨髓來源的成骨細(xì)胞核心結(jié)合因子β蛋白表達(dá)的影響 通過Western blot實(shí)驗(yàn)分析地塞米松對(duì)骨髓來源的成骨細(xì)胞核心結(jié)合因子β蛋白表達(dá)的影響,探討骨髓基質(zhì)干細(xì)胞體外向成骨細(xì)胞定向分化的機(jī)制.方法:取雄性8周ICR小鼠股骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行原代和傳代培養(yǎng),在細(xì)胞培養(yǎng)同時(shí)間點(diǎn)加入10<'-8>M地塞米松(實(shí)驗(yàn)組)或保持基礎(chǔ)培養(yǎng)條件(對(duì)照組).于不同時(shí)間點(diǎn)提取細(xì)胞核基質(zhì)蛋白后,應(yīng)用Western blot實(shí)驗(yàn)分析地塞米松

2、對(duì)骨髓來源的成骨細(xì)胞核心結(jié)合因子β蛋白的表達(dá).通過其表達(dá)觀察地塞米松對(duì)上述成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子的的影響.結(jié)論:10<'-8>mol/L地塞米松促進(jìn)小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化,而這種促分化作用可能與提高促成骨細(xì)胞分化的轉(zhuǎn)錄因子水平有關(guān).第二部分 辛伐他汀對(duì)小鼠骨髓來源的成骨細(xì)胞增殖的影響 通過觀察培養(yǎng)的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)來分析辛伐他汀對(duì)骨髓來源的成骨細(xì)胞形態(tài)及分裂增殖的影響.方法:培養(yǎng)細(xì)胞分為實(shí)驗(yàn)組(培養(yǎng)基中含地塞米松10<

3、'-8>mol/L和辛伐他汀濃度分別為10<'-5>、10<'-6>、10<'-7>mol/L)和對(duì)照組(培養(yǎng)基中含地塞米松10<'-8>mol/L和配制辛伐他汀溶液的對(duì)照液).原代培養(yǎng)小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞于標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基中(不含地塞米松),第5天細(xì)胞傳代.傳代細(xì)胞按2000個(gè)細(xì)胞/孔接種于96孔培養(yǎng)板中,于傳代培養(yǎng)當(dāng)日分別加入含辛伐他汀10<'-5>、10<'-6>、10<'-7>mol/L的培養(yǎng)基,各組分別以加地塞米松為對(duì)照組.采用Cell

4、Titer96試劑盒(Promega)以2日為間隔分別測(cè)定各試驗(yàn)組與對(duì)照組中每孔細(xì)胞數(shù).結(jié)論:辛伐他汀具有抑制骨髓基質(zhì)干細(xì)胞體外增生并促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)礦化的作用,而且這種作用具有濃度的依賴性.第三部分 地塞米松、辛伐他汀對(duì)小鼠骨髓來源的成骨細(xì)胞Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)的影響 通過基因轉(zhuǎn)染的方法分析地塞米松、辛伐他汀對(duì)小鼠成骨細(xì)胞Ⅰ型膠原蛋白的表達(dá)的影響以及確認(rèn)培養(yǎng)的成骨細(xì)胞的分化階段.方法:取雄性8周ICR小鼠股骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞加入10<'-8>m