慢性牙周炎中血管發(fā)生的表達變化及相關(guān)性分析.pdf

1、研究背景:
　　炎癥的發(fā)生、發(fā)展是機體一系列復雜的病理變化過程,其中血管的變化在炎癥的進展過程中發(fā)揮有重要作用。血管系統(tǒng)的擴張可以運送炎癥細胞至病損處,并為組織提供氧和營養(yǎng),同時為炎癥相關(guān)的多種分子提供底物。在組織中已存在的血管上,以出芽的方式形成新生血管的過程稱為血管發(fā)生。血管發(fā)生主要表現(xiàn)為組織中血管(主要是毛細血管)的擴張與增殖,在病理檢查可見血管直徑及數(shù)目的改變。血管發(fā)生與疾病的發(fā)展及預后有密切關(guān)系。
　　炎癥下血管發(fā)

2、生的過程,是由于多種因素導致促進血管發(fā)生的因子的過表達產(chǎn)生的,在各種細胞因子和生長因子的調(diào)節(jié)下,組織內(nèi)的分子信號可以發(fā)生發(fā)生復雜的相互作用。從而介導產(chǎn)生新血管形成過程中的一系列生理變化,如血管內(nèi)皮細胞的增殖和遷移、血管基底膜和細胞外基質(zhì)的降解及重塑、血管結(jié)構(gòu)的重建等。其中血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是作用于內(nèi)皮細胞的強有力的生長因子。VEGF通過對血管內(nèi)皮細胞的作用,

3、可提高血管的通透性,影響內(nèi)皮細胞的增殖、分化和遷移,同時還可以通過介導破骨細胞和成骨細胞的遷移影響骨的改建過程;基質(zhì)細胞衍生因子-1α(stromal cell-derived factor-1 alpha,SDF-1α)在多種細胞的存活、生長和遷移中均發(fā)揮有重要作用,可與 VEGF相互作用影響血管發(fā)生過程。
　　慢性牙周炎是由細菌侵入引發(fā)的,以牙周支持組織的慢性炎癥、牙周附著喪失和牙槽骨的破壞為特點的慢性炎癥性疾病,最終可導致牙

4、齒的缺失。牙周組織中血管發(fā)生的狀況對于組織的健康和牙周炎癥的進展具有重要意義,但與慢性牙周炎發(fā)生發(fā)展有何關(guān)系,調(diào)控血管發(fā)生的分子及其作用機制如何,仍無明確報道。
　　研究目的:
　　研究血管密度的變化與慢性牙周炎牙周組織破壞程度之間的關(guān)系,以及血管發(fā)生因子VEGF、SDF-1α等在牙周組織中的表達變化,探討血管發(fā)生對牙周炎癥的影響及相關(guān)因素。
　　研究方法:
　　實驗一:慢性牙周炎牙齦組織中血管密度的變化

5、　　在就診的患者中,根據(jù)納入標準和排除標準,選取符合條件的慢性牙周炎組和健康對照組的受試患者,說明研究目的和意義,征得患者理解,并簽署知情同意書;臨床檢測記錄患者牙周的探診深度(probing depth,PD)和臨床附著喪失(clinical attachment loss,CAL)程度;手術(shù)中獲取患牙牙齦組織,常規(guī)固定、包埋,制備組織切片;HE染色觀查組織形態(tài),免疫組化方法檢測CD31的表達,光學顯微鏡下計數(shù)CD31陽性表達管腔數(shù)目

6、,計算血管密度(microvessels density,MVD),統(tǒng)計學分析健康組與炎癥組血管密度的表達差異,及血管密度與PD和CAL之間的相關(guān)性。
　　實驗二:慢性牙周炎牙齦組織中血管發(fā)生因子的表達變化
　　標本同實驗一,通過免疫組化染色檢測VEGF和SDF-1α的表達,鏡下計數(shù)VEGF和SDF-1α表達的陽性細胞數(shù)目并統(tǒng)計分析,進而分析慢性牙周炎組織中血管發(fā)生因子表達量與PD和CAL的相關(guān)性;同法獲取患牙牙齦組織,提取

7、組織RNA,PCR技術(shù)分析兩組間細胞因子CD31、VEGF和SDF-1α基因水平的表達差異。
　　研究結(jié)果:
　　實驗一:
　　1、組織 HE染色可見,組織結(jié)構(gòu)上牙齦由上皮層和固有層組成,健康對照組可見上皮釘突插入固有層中,固有層有少量炎癥細胞的浸潤而慢性牙周炎組牙齦可見明顯的上皮釘突明顯向固有層中增生、伸長,固有層中有炎癥細胞大量聚集,上皮輕度過角化。
　　2、免疫組化染色結(jié)果顯示,CD31表達于所有血管內(nèi)皮細

8、胞,CD31陽性的血管主要位于組織固有層中;組間統(tǒng)計分析結(jié)果顯示,在慢性牙周炎組MVD的表達明顯高于健康對照組(P<0.05)。
　　3、Pearson回歸分析顯示,MVD與PD和CAL間存在直線正相關(guān)關(guān)系,且具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　實驗二:
　　1、免疫組化染色結(jié)果顯示,血管發(fā)生相關(guān)因子陽性表達主要位于牙齦組織的固有層。VEGF與SDF-1α主要表達于血管內(nèi)皮細胞、間質(zhì)細胞及部分炎癥細胞,且炎癥聚集處的

9、表達明顯增多。兩種指標均顯示在固有層炎癥浸潤廣泛部位表達明顯增強。
　　2、免疫組化和Real Time-PCR定量分析均顯示,血管發(fā)生相關(guān)因子VEGF和SDF-1α在慢性牙周炎組的表達與健康對照組相比均明顯升高,有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。
　　3、VEGF和SDF-1α表達量與PD和CAL間存在直線正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　在慢性牙周炎中,牙周組織血管密度的變化與牙周炎癥狀態(tài)、牙周組織破