阿伐他汀對糖尿病大鼠腎臟骨橋蛋白表達(dá)的影響及其分子機(jī)制.pdf

1、目的:研究阿伐他汀對糖尿病大鼠腎臟骨橋蛋白表達(dá)的影響,并初步探討其調(diào)控機(jī)制。方法:45只清潔級SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,隨機(jī)分為正常組、高脂對照組、糖尿病組、阿伐他汀組。正常組繼續(xù)給予普通飼料,高脂對照組給予高脂飼料(普通飼料+10％甘油三酯+5%膽固醇),糖尿病組和阿伐他汀組在用高脂飼料喂養(yǎng)8周后,空腹注射35mg/kg鏈尿佐菌素(STZ),一周后,尾部取血,測血清葡萄糖、甘油三酯、膽固醇等數(shù)值。注射STZ一周后,阿伐他汀組給予20m

2、g/(kg/d)阿伐他汀灌胃,8周后心臟取血,檢測各項血清數(shù)據(jù);取一只腎臟用于石蠟包埋,另一只凍于-80℃冰箱。石蠟切片用于HE染色觀察腎臟的病理學(xué)變化、免疫組化檢測骨橋蛋白(OPN)的表達(dá)變化,新鮮冰凍腎臟用于Westren blot。細(xì)胞實驗中,用25mM葡萄糖的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)MDCK細(xì)胞,分別加入不同濃度的阿伐他汀(100μM、10μM、1M)刺激48小時,從細(xì)胞中提取蛋白分析OPN的表達(dá)變化以及p38MAPK的磷酸化水平。結(jié)

3、果:成功復(fù)制了伴有高脂血癥的糖尿病大鼠模型,高脂對照組與正常組相比血清數(shù)據(jù)無明顯變化;糖尿病組大鼠在經(jīng)高脂飼料和STZ誘導(dǎo)后,血清葡萄糖、膽固醇濃度明顯高于正常組和高脂對照組(p<0.05);與糖尿病組相比,阿伐他汀組血清葡萄糖濃度無明顯變化,而血清膽固醇濃度明顯降低(p<0.05)。各組大鼠腎臟組織切片的HE染色顯示,正常組大鼠腎臟無明顯病理變化;糖尿病組大鼠腎小球略顯肥大,腎小囊呈裂隙狀,可見有輕微的系膜區(qū)擴(kuò)大,系膜基質(zhì)擴(kuò)散;腎小管

4、表現(xiàn)出輕微的肥大和水腫,呈明顯的空泡樣變性,小管間質(zhì)間有炎癥細(xì)胞浸潤。阿伐他汀治療后,腎小球和腎小管病變有明顯改善。免疫組化結(jié)果表明,OPN主要表達(dá)于腎小管,本實驗未檢測到腎小球中有表達(dá),與正常組相比,糖尿病組OPN表達(dá)明顯增多;與糖尿病組相比,阿伐他汀組OPN表達(dá)明顯降低。OPN的Western blot結(jié)果與免疫組化結(jié)果相吻合,與正常組相比,糖尿病組OPN表達(dá)明顯升高(p<0.05);與糖尿病組相比,阿伐他汀組OPN表達(dá)明顯降低(p

5、<0.05)。p38MAPK的磷酸化水平在各組中有明顯的變化,與正常組相比,糖尿病組pp38/p38的相對表達(dá)量明顯升高;與糖尿病組相比,阿伐他汀組明顯地降低。細(xì)胞實驗中,與低糖DMEM培養(yǎng)的正常組MDCK細(xì)胞相比,經(jīng)25mM葡萄糖刺激的高糖組MDCK細(xì)胞OPN表達(dá)量與p38磷酸化水平明顯地升高(p<0.05),與高糖組相比,1mM、10mM阿伐他汀刺激后,OPN表達(dá)量與p38磷酸化水平明顯地降低。結(jié)論:阿伐他汀可以明顯降低伴有高脂血癥