人端粒酶逆轉錄酶基因反義核酸結合位點的體外篩選.pdf

1、《中國圖書資料分類法》分類號單位代碼：10660分類號：R737.25學號：S080321貴陽醫(yī)學院貴陽醫(yī)學院2011屆碩士學位論文屆碩士學位論文人端粒酶逆轉錄酶基因反義核酸結合位點的體外篩選保密期限：2011年6月～2012年6月研究生：嚴波導師：陳方敏教授石家齊教授年級：2008級專業(yè)：泌尿外科2011年5月20日人端粒酶逆轉錄酶基因反義核酸結合位點的體外篩選2011屆泌尿外科碩士學位論文第1頁人端粒酶逆轉錄酶基因反義核酸結合位點的

2、體外篩選專業(yè)：泌尿外科研究生：嚴波導師：陳方敏教授石家齊教授【摘要】目的目的利用隨機寡核苷酸文庫RNaseH切割法并結合計算機軟件預測篩選人端粒酶逆轉錄酶（humantelomerasereversetranasehTERT）基因的反義核酸結合位點。方法方法合成20mer隨機寡核苷酸文庫，與體外轉錄出的全長hTERTcRNA雜交，RNaseH酶切割后，經(jīng)引物延伸、放射自顯影，篩選出26個針對hTERT基因的反義結合位點（antisens

3、eaccessiblesiteAAS）。結合RNAstructure軟件分析、選定具有顯著莖環(huán)結構的7個位點作為最佳反義結合位點，分別合成其反義寡核苷酸（AntisenseOligonucleotideASODN），轉染前列腺癌細胞PC3，運用MTT比色法及逆轉錄聚合酶鏈式反應（RTPCR）分別對前列腺癌細胞生長抑制及hTERTmRNA表達情況進行檢測，并與隨機寡核苷酸對照。結果結果hTERT基因7個最佳反義結合位點分別位于hTERTm

4、RNA690bp~709bp、752bp~771bp、982bp~1001bp、1094bp~1114bp、2284bp～2303bp、2490bp～2509bp、3311bp～3330bp。合成其互補性ASODN17轉染前列腺癌細胞PC3后，細胞生長受到明顯制抑，其中ASODN3的抑制作用最明顯(40.6%)，與對照組抑制率(9.7%)有統(tǒng)計學差異（p0.05），hTERTmRNA表達水平亦受到明顯抑制，也是以ASODN3的抑制作用最