黑色素瘤中線形程序性壞死與血管新生及預后關系的初步研究.pdf

1、目的：研究惡性黑色素瘤組織中線形程序性壞死(linearly patterned programmed cell necrosis,LPPCN)的分布及其形態(tài)學特點,并探討其臨床病理意義。初步分析LPPCN發(fā)生的相關分子機制及其與血管生成擬態(tài)(Vasculongenic mimicry,VM)和內皮依賴性血管(Endothelium dependent vessel,EDV)形成的相關性。
　　 方法：
　　 1.應用形

2、態(tài)學分析方法觀察惡性黑色素瘤中LPPCN的存在及其分布特點,并探討其臨床病理意義。
　　 自1996-2007年天津醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院存檔石蠟標本中,挑選出經手術切除的、病理論斷明確且隨訪資料完整的惡性黑色素瘤標本共70例,每例標本均進行HE切片后由有經驗的病理醫(yī)師核實臨床病理論斷,進一步觀察LPPCN的形態(tài)特點并分析LPPCN的分布和臨床病理意義。
　　 2.采用免疫組織化學方法初步分析黑色素瘤中LPPCN的發(fā)生機制

3、及其與血管新生的相關性。
　　 檢測黑色素瘤組織中Ⅲ型磷脂酰肌醇三磷酸激酶(ClassⅢPI3K)的表達情況,分析LPPCN與自噬的相關性。檢測組織中基質金屬蛋白酶2、9(Matrixmetalloproteinase2、9,MMP2、MMP9)、金屬蛋白酶組織抑制因子(TIMP-1)、組織蛋白酶D(CathepsinD,CathD)、CD105、TGFβ1、p-paxillin、Ⅷ因子相關抗原(Ⅷ-RAg)及D2-40等蛋白的

4、表達情況,同時進行CD31/PAS雙重染色計數(shù)血管生成擬態(tài)密度(Vasculogenicmimicrydensity,VMD),從而分析LPPCN與VM、內皮依賴性血管及淋巴管形成的相關性。
　　 3.利用實時熒光定量PCR(Real-timePCR)檢測LPPCN陽性組與陰性組中相關基因mRNA的表達差異,分析它們與LPPCN的關系。
　　 收集天津醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院組織庫2005年至今新鮮凍存標本黑色素瘤組織30例

5、,通過冰凍切片HE染色觀察其中是否存在LPPCN,將其分為LPPCN陽性組與LPPCN陰性組。利用Real-timePCR檢測兩組中目的基因ClassⅢPI3K、TGFβ1的表達差異,從mRNA的水平分析LPPCN的發(fā)生機制及其與血管生成的相關性。
　　 結果
　　 1.黑色素瘤中LPPCN的形態(tài)學分布特點及其臨床病理意義黑色素瘤標本中LPPCN陽性率為54.29％(38/70),LPPCN在HE鏡下形態(tài)為一簇胞質濃縮、

6、胞核深染的腫瘤細胞,呈線形或網狀分布。LPPCN陽性率在不同的腫瘤大小、核分裂像數(shù)目及breslow厚度之間差別均具有統(tǒng)計學意義,而與性別、年齡、部位、有無瘤栓、淋巴結轉移及復發(fā)與遠處轉移均無關。患者的生存率在LPPCN陽性組低于陰性組(P=0.046)。
　　 2.免疫組化染色結果分析在黑色素瘤組織中,LPPCN陽性組ClassⅢPI3K、CD105標記的微血管密度(microvesseldensity,MVD)、TGFβ1、

7、Ⅷ-RAg-MVD、VMD及MMP2表達高于LPPCN陰性組,差別均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；而D2-40標記的微淋巴管密度(lymphvesseldensity,LVD)、MMP9、CathD在兩組間表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；ClassⅢPI3K、TGFβ1在發(fā)生LPPCN的腫瘤細胞中的表達高于周圍的腫瘤細胞,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。CD105與TGFβ1的表達呈正相關；CD105-MVD、Ⅷ-RAg-M

8、VD及VMD均與LPPCN的密度呈正相關。p-paxillin在黑色素瘤組織中呈普遍低或無表達,也可見其在部分血管內皮細胞中表達。
　　 VM陽性組MMP2、MMP9表達高于VM陰性組,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；且TIMP-1在VM陽性組的表達低于VM陰性組,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；CathD在兩組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。同時本實驗結果提示D2-40標記的LVD在淋巴結轉移陽性組高于陰性組,差別

9、均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 3.Real-timePCR結果分析Real-timePCR結果顯示,在惡性黑色素瘤組織中,LPPCN陽性組中ClassⅢPI3K、TGFβ1mRNA表達均高于LPPCN陰性組,與免疫組化結果趨勢一致,但僅TGFβ1mRNA表達量在兩組間的表達差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 結論：
　　 1.惡性黑色素瘤中存在LPPCN及VM,具有LPPCN及VM的患者預后差。