抗乙肝病毒多肽藥物C20-MTS的原核細(xì)胞表達(dá)、純化及其體外功能研究.pdf

1、目的：乙型肝炎是一種嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康和公共衛(wèi)生的全球性傳染病。雖然乙肝的防治已取得了很大進(jìn)步，但目前仍缺乏療效好、毒副作用低、價(jià)格便宜的藥物。因此，尋找新的抗病毒作用靶位，研制與現(xiàn)有藥物不同作用機(jī)理的新藥，具有重要的臨床意義。本實(shí)驗(yàn)室前期研究中利用酵母雙雜交系統(tǒng)，篩選得到一條與HBV核心蛋白結(jié)合能強(qiáng)的多肽序列（C20/C20-MTS）。鑒于前期研究發(fā)現(xiàn)該多肽在表達(dá)時(shí)形成大量包涵體，且在技術(shù)上未能很好地解決其變性及復(fù)性問(wèn)題，本研究主要嘗試

2、對(duì)C20/C20-MTS蛋白進(jìn)行可溶性表達(dá)，并在體外檢測(cè)該多肽對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞乙肝病毒的抑制效果，從而為開(kāi)發(fā)針對(duì)HBV核心蛋白的新型肽類(lèi)藥物提供依據(jù)。
　　方法：通過(guò)基因工程技術(shù)構(gòu)建pMAL-c5x-C20/C20-MTS重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化到E.coli Rosatte（DE3）菌株中，探索不同溫度、不同誘導(dǎo)時(shí)間和不同IPTG濃度對(duì)C20-MTS蛋白可溶性表達(dá)的影響；利用親和層析技術(shù)純化目的蛋白，之后利用ELISA和West

3、ern blot技術(shù)檢測(cè)C20/C20-MTS蛋白對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)液上清HBsAg和細(xì)胞內(nèi)HBcAg含量的影響。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建了pMAL-c5x-C20/C20-MTS重組質(zhì)粒，實(shí)現(xiàn)了其在原核細(xì)胞中的大量可溶性表達(dá)；得到了濃度為0.085mg/ml的C20-MTS蛋白，濃度為0.093mg/ml的C20蛋白，兩者的純度均達(dá)到90％；初步藥效顯示：C20-MTS加藥量超過(guò)0.1μg/ml時(shí)，開(kāi)始抑制HBV病毒的復(fù)