雷帕霉素及脾切除對(duì)肝纖維化進(jìn)展的影響.pdf

1、目的：通過(guò)建立肝纖維化模型，利用雷帕霉素（Rapamycin，RAPA）及脾切除手術(shù)對(duì)肝纖維化模型的治療，調(diào)節(jié)肝纖維化形成的關(guān)鍵因子轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)的表達(dá)，觀察雷帕霉素、脾切除及兩者聯(lián)合治療對(duì)肝纖維化進(jìn)展的影響，探討三種方法在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中治療肝纖維化的效果及可能的機(jī)制，為臨床上治療肝纖維化提供一定的理論和應(yīng)用依據(jù)。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)分為5組:A組為正常對(duì)照

2、組，B組為肝纖維化模型組，C組為雷帕霉素組（肝纖維化模型+雷帕霉素組），D組為脾切除組（肝纖維化模型+脾切除組），E組為聯(lián)合治療組（肝纖維化模型+雷帕霉素+脾切除組）。每組6只SD雄性大鼠，B、C、D、E組分別按照3mL/kg體重皮下注射濃度為40％體積濃度的四氯化碳油溶液，每周兩次，連續(xù)八周，空白組則皮下注射生理鹽水。在建立肝纖維化模型期間，D、E組于第6周行脾切除，制作病理切片及免疫組化，觀察脾臟TGF-β1的表達(dá);脾切除術(shù)后第一天

3、C、E組同時(shí)予雷帕霉素2mg/kg體重灌胃，每天一次，持續(xù)2周，A、B、D組用生理鹽水同劑量灌胃;分別于第3、6、8周3個(gè)時(shí)間點(diǎn)通過(guò)眼眶取血，收集大鼠血液1mL，室溫凝固30分鐘后，2-8℃放置過(guò)夜，1500轉(zhuǎn)離心15分鐘，取血清-70℃冰凍保存待測(cè)TGF-β1濃度;于第8周處死所有大鼠，取肝臟、脾臟組織制作病理切片及免疫組化，觀察肝脾組織學(xué)改變及TGF-β1的表達(dá)。
　　 結(jié)果：⑴四氯化碳油建立肝纖維化模型，通過(guò)與對(duì)照組比較，

4、病理組織切片可以觀察到匯管區(qū)纖維間隔增生，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，小膽管增生，部分可見(jiàn)假小葉形成，肝纖維化模型建立成功。⑵免疫組織化學(xué)顯示，隨著肝纖維化模型的建立，肝臟、脾臟組織TGF-β1的表達(dá)與對(duì)照組有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，雷帕霉素組的肝脾組織TGF-β1表達(dá)有明顯減少(P＜0.01)，脾切除組中的肝臟TGF-β1亦有所改善，聯(lián)合治療組優(yōu)于雷帕霉素組及脾切除組(P＜0.01)。⑶在模型建立期間，第3、6、8周各抽取血液1mL行EL

5、ISA測(cè)定血清TGF-β1濃度，顯示從第6周開(kāi)始血清TGF-β1較前明顯增加。經(jīng)雷帕霉素治療，血清TGF-β1濃度較模型組有明顯減低（P＜0.05），脾切除組亦有所減少(P＜0.05)，聯(lián)合治療組中的TGF-β1表達(dá)較脾切除組低，與雷帕霉素組沒(méi)顯著差異（P＞0.05）。
　　 結(jié)論：⑴建立肝纖維化模型，TGF-β1與肝纖維化程度呈正相關(guān)性。⑵在肝纖維化模型中，通過(guò)脾切除手術(shù)，去除脾源性TGF-β1的表達(dá)，減少對(duì)肝臟組織影響，改善