熊果酸對(duì)大鼠肝纖維化及TGFβ1表達(dá)的影響.pdf

1、背景: 肝纖維化是肝臟對(duì)各種原因所致肝損傷的創(chuàng)傷愈合反應(yīng)，以肝內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)過(guò)度沉積為特征，是各種慢性肝病共有的病理基礎(chǔ)。研究表明，肝纖維化是可以逆轉(zhuǎn)的，但臨床上至今缺乏確切有效的抗肝纖維化藥物與方法。近幾年研究發(fā)現(xiàn)我國(guó)的中草藥具有良好的抗肝纖維化療效。本研究根據(jù)國(guó)外研究現(xiàn)狀及我們的前期工作基礎(chǔ)，將熊果酸作用于二甲基亞硝胺(DMN)誘導(dǎo)的肝纖維化實(shí)驗(yàn)大鼠，研究熊果酸對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝纖維化的治療作用及作用機(jī)制，為肝纖維化治療提

2、供新的治療方案。 目的: 通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察熊果酸對(duì)肝纖維化大鼠肝功能、肝臟組織病理學(xué)的影響；并通過(guò)觀察熊果酸抗氧化作用、對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF β1)基因及蛋白水平表達(dá)以及對(duì)α-SMA蛋白表達(dá)的影響，探討熊果酸抗肝纖維化的可能作用機(jī)理。 方法: 采用1％DMN(1ml/kg)溶液予大鼠腹腔注射誘導(dǎo)肝纖維化模型，正常對(duì)照組給予生理鹽水腹腔注射，每周連續(xù)3天，持續(xù)4周。造模結(jié)束后將大鼠隨機(jī)分組并開始每天腹腔給

3、藥，正常對(duì)照組和模型組予以生理鹽水；秋水仙堿組用量為0.1mg/kg/d；熊果酸低、中、高劑量組用量分別為10mg/kg/d、20mg/kg/d、40mg/kg/d。分別在藥物治療2周、4周采用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)各組大鼠血清ALT、AST、TP、ALB、A/G。藥物治療4周后肉眼觀察各組大鼠肝臟大體表現(xiàn)；HE染色觀察肝小葉結(jié)構(gòu)、肝細(xì)胞壞死程度及纖維組織增生程度；VG染色觀察膠原纖維增生程度；采用TBA法檢測(cè)血清SOD、MDA的含量；RT-

4、PCR方法檢測(cè)TGF β 1mRNA的表達(dá)；免疫組織化學(xué)檢測(cè)TGF β1蛋白的表達(dá)；Westernblot方法檢測(cè)α-SMA蛋白的表達(dá)。 結(jié)果: 1、DMN誘導(dǎo)的模型組與正常對(duì)照組相比大鼠血清肝功能指標(biāo)ALT、AST的含量均明顯升高，ALB、A/G含量下降(P<0.01)；熊果酸各劑量組和秋水仙堿作用肝纖維化大鼠2周、4周后ALT、AST相比模型組明顯降低，ALB、A/G則明顯升高(P<0.05，P<0.01)。熊果酸中

5、、高劑量組療效明顯優(yōu)于秋水仙堿組(P<0.05，P<0.01)，熊果酸高劑量對(duì)肝功能改善優(yōu)于中劑量組(P<0.05)。 2、肉眼觀察模型組大鼠肝臟體積增大，顏色變淺，邊緣鈍，質(zhì)地硬，表面有粗顆粒狀表現(xiàn)，與周圍器官粘連廣泛；肉眼觀察熊果酸治療組和秋水仙堿作用4周后肝臟有明顯改善。HE染色模型組肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂、肝細(xì)胞壞死明顯、間質(zhì)細(xì)胞大量彌漫增生、纖維組織增生明顯，形成肝纖維化；VG染色模型組匯管區(qū)見(jiàn)大量膠原纖維，膠原纖維構(gòu)成的纖維

6、間隔形成，肝竇內(nèi)不連續(xù)的或斷續(xù)性環(huán)狀膠原沉積，肝臟組織膠原纖維增生程度與正常對(duì)照組比較明顯升高(P<0.01)。HE和VG染色熊果酸中、高治療組與模型組相比肝組織肝小葉結(jié)構(gòu)改善，肝細(xì)胞壞死和纖維組織增生明顯減輕(P<0.05，P<0.01)。熊果酸高劑量組療效要優(yōu)于中劑量組。秋水仙堿組與模型組相比無(wú)明顯差異(P>0.05)。 3、模型組SOD值較正常對(duì)照組明顯降低(P<0.01)，而MDA值較正常對(duì)照組MDA明顯升高(P<0.0

7、1)；不同劑量熊果酸作用4周后SOD值均比模型組顯著升高(P<0.01)，秋水仙堿組與模型組相比無(wú)明顯差異(P>0.05)；熊果酸各劑量組和秋水仙堿組與模型組相比MDA值顯著降低(P<0.01)，熊果酸各劑量組與秋水仙堿組相比有顯著差異(P<0.01)。 4、模型組α-SMA蛋白的表達(dá)較正常對(duì)照組明顯升高(P<0.01)；不同劑量熊果酸作用4周后α-SMA蛋白的表達(dá)較模型組明顯降低(P<0.01)，高劑量組作用最為明顯；秋水仙堿

8、組與模型組無(wú)明顯差異，熊果酸中、高劑量組與秋水仙堿組相比α-SMA蛋白的表達(dá)顯著降低(P<0.01)。 5、模型組TGF β1mRNA的表達(dá)較正常對(duì)照組明顯升高(P<0.01)；不同劑量熊果酸作用4周后TGF β1mRNA的表達(dá)較模型組明顯降低(P<0.05，P<0.01)高劑量組作用最為明顯；秋水仙堿作用4周后TGF β1mRNA的表達(dá)較模型組明顯降低(P<0.05)，熊果酸中、高劑量組相比秋水仙堿組TGF β1mRNA的表達(dá)

9、顯著降低(P<0.05，P<0.01)。 6、正常肝組織中僅微弱表達(dá)TGF-β1蛋白，顯色極淡。模型組較正常組TGF-β1陽(yáng)性信號(hào)明顯增強(qiáng)(P<0.01)，不同劑量熊果酸作用4周后TGF-β1蛋白的表達(dá)較模型組明顯減少(P<0.05，P<0.01)，高劑量組作用最為明顯；秋水仙堿作用4周后TGF β1蛋白的表達(dá)較模型組明顯降低(P<0.01)，；中高劑量組與秋水仙堿組比較亦有顯著差異(P<0.01)。 結(jié)論: ①

10、熊果酸具有明顯改善肝纖維化作用，表現(xiàn)在熊果酸可降低ALT、AST，升高ALB、A/G，改善肝纖維化大鼠肝功能，并呈劑量-時(shí)間依賴性，中高劑量熊果酸療效優(yōu)于秋水仙堿；組織病理學(xué)示熊果酸可改善肝小葉結(jié)構(gòu)，明顯減輕肝細(xì)胞壞死，減少膠原纖維的沉積和纖維組織增生，且均呈劑量依賴性；療效優(yōu)于秋水仙堿，40mg/kg/d劑量組抗肝纖維化作用優(yōu)于20mg/kg/d劑量組； ②熊果酸抗肝纖維化的可能作用機(jī)制表現(xiàn)在：1)通過(guò)增加SOD值、降低MDA