獨一味顆粒對肝纖維化大鼠肝組織TGF-β1表達的影響.pdf

1、目的：本課題是在前期實驗的研究基礎上，通過觀察獨一味顆粒對肝纖維化模型大鼠肝組織TGF-β1表達的影響，探討獨一味顆粒抗纖維化的作用機理，拓展獨一味的臨床應用空間，為臨床提供理論支持。
　　方法：將78只雄性SD大鼠，隨機分為空白對照組、模型組、秋水仙堿組、獨一味高、中、低劑量組，共6組，每組13只。采用皮下注射CCl4油劑（首劑5ml/kg，其后3ml/kg）聯(lián)合高脂飼料的復合法，綜合誘導大鼠肝纖維化模型，空白對照組注射等量橄欖

2、油，均為每3天1次，連續(xù)8周。自實驗第一天開始，秋水仙堿組給藥（0.045 g/kg）灌胃，獨一味治療組分別給予高（2.4g/kg）、中（1.2g/kg）、低（0.6g/kg）三種劑量獨一味顆粒溶液灌胃，模型組和空白對照組予等量的生理鹽水，至第8周。實驗結束后，全部大鼠采取股動脈放血處死，離心分離血清，放射免疫法測定血清中透明質酸(Hyaluronic acid，HA)、層粘連蛋白(Laminin，LN)、III型前膠原(procoll

3、agen type III，PCIII)及IV型膠原(collagen-IV，IV-C)的含量。取肝最大葉相同部位1cm×1cm×0.5cm大小的肝組織，置于10％甲醛緩沖液中固定，石蠟包埋切片，常規(guī)HE及Masson染色，光學顯微鏡下觀察肝臟組織形態(tài)和纖維增生等情況，免疫組化測定肝組織中TGF-β1蛋白表達，實時熒光定量技術檢測肝組織TGF-β1mRNA表達。
　　結果：①血清HA、LN、PCIII、Ⅳ-C含量：與空白對照組比較

4、，模型組大鼠血清肝纖指標均顯著升高(p<0.01)；與模型組的比較，各給藥組均能顯著降低大鼠血清的HA、LN、PCIII、Ⅳ-C含量(p<0.01)；與秋水仙堿組比較，獨一味治療組在LN、PCIII差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
　　②肝組織病理形態(tài)學顯示：空白組肝組織胞質豐富，匯管區(qū)未見炎細胞滲出及纖維組織異常增生；與空白組比較，模型組大鼠肝小葉結構嚴重破壞，肝組織中有炎性細胞的浸潤，大部分的標本可見程度、范圍不等的肝細胞壞

5、死肝細胞廣泛的脂肪變性；與模型組比較，秋水仙堿組大鼠肝小葉結構基本恢復，細胞變性壞死的明顯減輕，僅匯管區(qū)少量的膠原沉積，無明顯纖維間隔的形成；而獨一味各組的肝小葉結構存在，排列欠整齊，可見少量炎細胞浸潤，程度較模型組減輕，纖維增生的不明顯。
　　③大鼠肝組織 TGF-β1免疫組化顯示：空白對照組大鼠肝組織中可見少量TGF-β1基礎性表達，存在于肝組織的間質細胞內；模型組大鼠肝組織中TGF-β1表達明顯增強，數(shù)目增多，呈棕黃色胞漿型

6、分布；各給藥組大鼠肝組織中TGF-β1在匯管區(qū)及纖維間隔中有少量表達，陽性染色程度較模型組明顯減輕。
　　④大鼠肝組織 TGF-β1mRNA表達水平：與空白對照組相比較，模型組大鼠肝組織 TGF-β1mRNA的表達明顯較高，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.01），與模型組相比較，各用藥組大鼠肝組織 TGF-β1mRNA表達水平差異有統(tǒng)計學意義（p<0.01），且獨一味高劑量組優(yōu)于秋水仙堿組。
　　結論：獨一味顆?？梢燥@著降低肝纖維