辛伐他汀、美托洛爾對肥大心室肌細(xì)胞瞬時外向鉀電流和鈣電流的影響及分子機(jī)制.pdf

1、目的：探討辛伐他汀、美托洛爾對肥大心室肌細(xì)胞瞬時外向鉀電流和鈣電流的影響及分子機(jī)制。 方法： 1．分離、培養(yǎng)健康新生Spraque—Dawley（SD）大鼠（出生后1～5天）心室肌細(xì)胞； 2．實驗分組：正常對照組；誘導(dǎo)組，培養(yǎng)液中加入10—6mol/L血管緊張素Ⅱ（Ang n）后培養(yǎng)48小時；辛伐他汀干預(yù)①組～⑤組先分別加入10—8mol/L、10—7mol/L、10—6mol/L、10—5mol/L、104mo

2、l/L辛伐他汀，60分鐘后均加入106mol/L AngⅡ，繼續(xù)培養(yǎng)48小時。美托洛爾干預(yù)①組～⑤組先分別加入10—8mol/L、10—7 mol/L、10—6mol/L、10—5mol/L、10—4mol/L美托洛爾，60分鐘后均加入106mol/L AngⅡ，繼續(xù)培養(yǎng)48小時； 3．MTT（四甲基偶氮唑鹽）比色法檢測細(xì)胞增殖；考馬斯亮蘭法測定細(xì)胞蛋白濃度； 4．采用膜片鉗全細(xì)胞技術(shù)記錄心室肌細(xì)胞膜電容、動作電位、瞬時

3、外向鉀電流和鈣流電流； 5．采用RT—PCR技術(shù)檢測心室肌細(xì)胞瞬時外向鉀通道Kv1．4、Kv4．2、Kv4．3 mRNA表達(dá)和鈣通道Cav1．2、Cav3．1、Cav3．2mRNA表達(dá)； 6．采用western blot技術(shù)，檢測心室肌細(xì)胞T型鈣通道α1—G蛋白表達(dá)。 結(jié)果： （1）辛伐他汀對肥大心室肌細(xì)胞動作電位、瞬時外向鉀電流和鈣電流的影響： 對照組、誘導(dǎo)組和不同濃度辛伐他汀干預(yù)組靜息電位（R

4、P），最大除極速率（Vmax），動作電位幅度（APA），動作電位超射（OS）均無明顯差異（P>0．05）；誘導(dǎo)組動作電位時程APD25、APD50和APD90較對照組均明顯延長（P<0．05）；干預(yù)組①和干預(yù)組②APD25、APD50和APD90與誘導(dǎo)組無明顯差別（P>0．05）；干預(yù)組③，④組和⑤組APD25、 APD50和APD90均較誘導(dǎo)組明顯縮短（P<0．05）。 誘導(dǎo)組心室肌細(xì)胞L型鈣流（ICa—L）、T型鈣流（ICa

5、—T）峰值電流均升高，而瞬時外向鉀流（Ito）峰值電流明顯下降（P<0．05）。干預(yù)組①和干預(yù)組②的ICa—L、ICa—T及Ito峰值電流與誘導(dǎo)組比較無明顯差異（P<0．05）；干預(yù)組③，干預(yù)組④和干預(yù)組⑤的ICa—L、ICa—T峰值電流均較誘導(dǎo)組明顯降低（P<0．05）； Ito峰值電流均明顯升高（P<0．05）；但激活電壓、反轉(zhuǎn)電位、穩(wěn)態(tài)激活、穩(wěn)態(tài)失活、失活后恢復(fù)，對照組、誘導(dǎo)組及干預(yù)各組間無明顯差異（P>0．05）。 （2

6、）辛伐他汀對肥大心室肌細(xì)胞瞬時外向鉀通道和鈣通道基因表達(dá)的影響： 誘導(dǎo)組Kv4．2、Kv4．3 mRNA表達(dá)水平較對照組明顯降低（P<0．05），Kv1．4、Cav1．2、Cav3．1、Cav3．2 mRNA表達(dá)水平明顯升高（P<0．05），T型鈣通道蛋白α1—G表達(dá)水平明顯升高（P<0．05>。辛伐他汀干預(yù)組①和干預(yù)組②的Kv4．2、Kv4．3、Kv1．4、Cav1．2、Cav3．1、Cav3．2 mRNA表達(dá)水平及T型鈣通道

7、蛋白α1—G表達(dá)水平與誘導(dǎo)組比較均無顯著差異（p>0．05）。與誘導(dǎo)組比較，干預(yù)組③，干預(yù)組④和干預(yù)組⑤的Kv4．2、Kv4．3mRNA表達(dá)明顯上調(diào)（p<0．05）； Kv1．4、Cav1．2、Cav3．1、Cav3．2 mRNA表達(dá)水平明顯下降（p<0．05）；T型鈣通道蛋白α1—G表達(dá)水平明顯降低（p<0．05）。 （3）美托洛爾對肥大心室肌細(xì)胞動作電位、瞬時外向鉀電流和鈣電流的影響： 對照組、誘導(dǎo)組和不同濃度美托洛

8、爾干預(yù)組RP，Vmax，APA，OS均無明顯差異（P>0．05）。與對照組比較，誘導(dǎo)組APD25、APD50和APD90均明顯延長（P<0．05）。與誘導(dǎo)組比較，干預(yù)組①和干預(yù)組②APD25、APD50和APD90均無明顯差別（P>0．05）；干預(yù)組③，干預(yù)組④和干預(yù)組⑤APD25、APD50和APD90均明顯縮短（P<0．05）。 與對照組比較，誘導(dǎo)組心室肌細(xì)胞ICa—L、ICa—T峰值電流均升高（P<0．05），而Ito峰值

9、電流大小明顯下降（P<0．05），但激活電壓、反轉(zhuǎn)電位與對照組相比較無明顯差異；穩(wěn)態(tài)激活、穩(wěn)態(tài)失活、失活后恢復(fù)也無明顯差異。與誘導(dǎo)組比較，美托洛爾干預(yù)組①和干預(yù)組②的ICa—L、ICa—T及Ito峰值電流均沒有明顯變化（P>0．05）；干預(yù)組③，干預(yù)組④和干預(yù)組⑤的ICa—L、 ICa—T峰值電流均明顯降低（P<0．05）；Ito峰值電流均明顯升高（P<0．05）；但激活電壓、反轉(zhuǎn)電位與對照組相比較無明顯差異；穩(wěn)態(tài)激活、穩(wěn)態(tài)失活、失活后

10、恢復(fù)也無明顯差異。 （4）美托洛爾對肥大心室肌細(xì)胞瞬時外向鉀通道和鈣通道基因表達(dá)的影響： 與對照組比較，誘導(dǎo)組Kv4．2、Kv4．3 mRNA表達(dá)水平明顯降低（P<0．05），Kv1．4、Cav1．2、Cav3．1、Cav3．2 mRNA表達(dá)水平明顯升高（P<0．05），T型鈣通道蛋白α1—G表達(dá)水平明顯升高（P<0．05）。與誘導(dǎo)組比較，美托洛爾干預(yù)組①和干預(yù)組②的Kv4．2、Kv4．3、Kv1．4、Cav1．2、Ca

11、v3．1、Cav3．2 mRNA水平及T型鈣通道蛋白α1—G表達(dá)水平均無顯著差異（p>0．05）；干預(yù)組③，干預(yù)組④和干預(yù)組⑤的Kv4．2、Kv4．3 mRNA表達(dá)水平明顯上升（P<0．05），Kv1．4、Cav1．2、Cav3．1、Cav3．2 mRNA表達(dá)水平明顯下降（P<0．05），T型鈣通道蛋白α1—G表達(dá)水平明顯降低（P<0．05）。 結(jié)論： （1）肥大心室肌細(xì)胞動作電位時程較對照組延長，ICa—L、ICa—T

12、增大，Ito電流密度下降，提示肥大心肌細(xì)胞存在復(fù)極異常，其機(jī)制為Kv4．2、Kv4．3 mRNA表達(dá)下調(diào)，Kv1．4、Cav1．2、Cav3．1、Cav3．2 mRNA和T型鈣通道蛋白α1—G表達(dá)上調(diào)。 （2）辛伐他汀干預(yù)降低ICa—T、ICa—L，升高Ito，縮短動作電位，提示辛伐他汀干預(yù)降低心肌細(xì)胞復(fù)極異常，逆轉(zhuǎn)心室重構(gòu)，其機(jī)制為上調(diào)Kv4．2、Kv4．3 mRNA表達(dá)，下調(diào)Kv1．4、Cav1．2、Cav3．1、Cav3．