中藥甘松揮發(fā)油對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞膜瞬時(shí)外向鉀電流(I-,to-)的影響.pdf

1、目的：觀察不同濃度中藥甘松揮發(fā)油對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞膜瞬時(shí)外向鉀電流（Transient outward potassium current，Ito）的作用，及甘松揮發(fā)油對(duì)Ito的量-效曲線、電流-電壓（I-V）曲線、激活曲線和失活曲線的影響，探討中藥甘松揮發(fā)油抗心律失常作用的離子機(jī)制。 方法： 1.用急性酶解分離法分離大鼠心室肌細(xì)胞，以肝素抗凝，戊巴比妥鈉麻醉大鼠后，迅速取出大鼠心臟，懸掛于Langendoff灌流系統(tǒng)離體

2、灌流。先以無鈣臺(tái)氏液灌流心臟約5分鐘，再以50微摩爾/升（μmol/L）含蛋白酶E（ProNaseE）和膠原酶Ⅰ（CollagenNase）的低鈣酶液灌流心臟，待心臟質(zhì)地明顯松軟，則停止酶液消化，再以200μmol/L低鈣臺(tái)氏液灌流，沖洗灌流系統(tǒng)及心臟中殘留酶液，然后剪下心室肌組織塊并置于盛有KB液的燒杯中充分剪碎、輕輕吹打、過濾后置于KB液中室溫下孵育1-2小時(shí)。 2.采用標(biāo)準(zhǔn)的全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)，選取桿狀無收縮、邊緣完整、橫紋

3、清晰和大小適中的細(xì)胞在室溫下進(jìn)行膜片鉗電流記錄，以電阻為1.0-3.0兆歐姆（MQ）的玻璃微電極封接大鼠心室肌細(xì)胞，形成吉?dú)W高阻封接水平后以適當(dāng)程度的負(fù)壓破膜，補(bǔ)償串聯(lián)電阻和細(xì)胞膜電容（Cm），形成全細(xì)胞記錄模式，分別測(cè)定Ito的量-效曲線、電流-電壓（I-V）曲線、激活曲線和失活曲線，觀察不同濃度的甘松揮發(fā)油對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞膜Ito的影響。 結(jié)果： 1.甘松揮發(fā)油可呈濃度依賴性抑制大鼠心室肌細(xì)胞膜Ito峰值電流（pea

4、kcurrent）。在測(cè)試脈沖電壓為+70mV時(shí)，甘松揮發(fā)油濃度為3μg/g、6μg/g、10μg/g和20μg/g對(duì)Ito峰值電流的抑制率分別為：（27.01±6.93）％，（51.13±9.82）％，（80.86±4.63）％和（94.81±4.30）％（n=5，P<0.05）。 2.甘松揮發(fā)油對(duì)Ito的電流密度-電壓關(guān)系曲線（current density-voltage curve，I-V曲線）的影響：在測(cè)試脈沖電壓為+

5、70mV時(shí)，6μg/g甘松揮發(fā)油使Ito峰值電流從（23.08±0.74）pA/pF減少到（11.23±1.47）pA/pF （n=5，P<0.05），給藥后Ito峰值電流密度減少約50％，給藥前后電流密度變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.甘松揮發(fā)油對(duì)Ito激活動(dòng)力學(xué)的影響：在甘松揮發(fā)油6μg/g灌流法給藥后，激活曲線顯示給藥前后半數(shù)激活電壓（V1/2）為：（36.17±3.36）mVvs（32.23±4.41）mV（n=5，P>0.05

6、）；斜率因子（S）為：24.00±2.79vs28.75±4.50（n=5，P>0.05）。給藥前后半數(shù)激活電壓和斜率因子變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4.甘松揮發(fā)油對(duì)Ito失活動(dòng)力學(xué)的影響：失活曲線顯示甘松揮發(fā)油使失活曲線明顯左移，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義：給藥前后半數(shù)失活電壓（V1/2）為（-33.74±0.48）mVvs（-40.54±0.70）mV（n=5，P<0.01）；斜率因子（S）為：5.00±0.40vs8.42±0.62（n

7、=5，P<0.01）。 結(jié)論： 1.甘松揮發(fā)油可呈濃度依賴性抑制大鼠心室肌細(xì)胞膜Ito電流，隨著濃度增加阻斷作用增強(qiáng)； 2.甘松揮發(fā)油可使Ito的電流密度-電壓關(guān)系曲線（I-V曲線）下移； 3.甘松揮發(fā)油對(duì)Ito激活曲線（activation curve）無明顯影響； 4.甘松揮發(fā)油對(duì)Ito失活曲線（inactivation curve）有明顯影響，給藥后失活曲線明顯左移，減少Ito電流使心室肌細(xì)