右美托咪定對大鼠心室肌細胞膜ATP敏感性鉀通道電流的影響.pdf

1、右美托咪定(dexmedetomidine, DEX)為咪唑啉類衍生物，是一種新型的α2腎上腺素能受體激動劑，作為麻醉輔助用藥，近年來越來越得到廣泛應(yīng)用。臨床研究發(fā)現(xiàn)，DEX具有多方面心肌保護作用，可對抗心肌缺血/再灌注損傷，減少心律失常的發(fā)生，而其機制尚未明了。大量研究顯示，當(dāng)心肌缺血缺氧時，心室肌細胞膜ATP敏感性鉀通道(sarcKATP)在誘發(fā)電信號傳導(dǎo)紊亂，導(dǎo)致心律失常過程中發(fā)揮重要作用。然而DEX抗缺血/再灌注心律失常作用的機

2、制是否與sarcKATP通道有關(guān)，尚未報道。
　　目的：本實驗擬利用全細胞膜片鉗技術(shù)觀察DEX對大鼠心室肌細胞膜ATP敏感性鉀通道電流(ATP sensitive potassium current, IKATP)大小的影響，探討DEX對抗缺血/再灌注心律失常的電生理機制。
　　方法：成年雄性SD大鼠，利用Langendorff離體心臟灌流裝置進行酶解分離，獲得單個的心室肌細胞。利用膜片鉗技術(shù)記錄心室肌細胞膜ATP敏感性鉀通

3、道電流的變化。將細胞置于顯微鏡載物臺標(biāo)本小浴槽中，控制恒溫和恒速細胞外液灌流，使用玻璃微管和細胞緊密接觸形成高阻封接，再給予一定負壓吸破細胞膜，形成全細胞記錄模式。在電壓鉗模式下，通過運行pclamp記錄程序，完成電流的誘發(fā)和采集。正常鉀電流記錄灌流液中加入KATP通道特異性開放劑吡那地爾(pinacidil, PIN,100μM)使細胞膜KATP通道開放后，根據(jù)灌流液中繼續(xù)給藥的不同將細胞隨機分為四組，每組4個細胞：
　　1 G

4、lib組，在灌流液中加入KATP通道阻斷劑格列苯脲(glibenclamide, Glib)50μM，觀察電流的變化。
　　2 DEX組，依次用含有DEX0.01μM、1μM、100μM的灌流液灌流，觀察DEX對細胞膜IKATP的影響。
　　3 DEX+YOH組，在灌流液中加入DEX1μM，之后再加入α2腎上腺素能受體阻斷劑育亨賓(yohimbine, YOH)1μM，觀察IKATP的變化。
　　4 DEX+IDA組，

5、在灌流液中加入DEX1μM，之后再加入咪唑啉受體阻斷劑咪唑克生(idazoxan, IDA)1μM，觀察IKATP的變化。
　　結(jié)果：
　　1 Glib組：在60mV測試電壓下，背景電流值為10.7±1.1pA/pF，100μM吡那地爾使電流增加至20.6±1.3pA/pF(P<0.05)，50μM格列本脲可使電流恢復(fù)至11.5±1.3pA/pF。結(jié)果表明，吡那地爾所增大的電流就是IKATP，此電流可被50μM格列本脲所完全

6、阻斷。
　　2 DEX組：灌流液中先后加入吡那地爾100μM，DEX0.01μM、1μM、100μM。在60mV測試電壓下，IKATP分別為：10.1±0.4、9.0±0.7、6.6±0.6和1.7±0.5pA/pF。與吡那地爾相比較，DEX0.01μM，1μM和100μM分別使IKATP降低11.2±3.8、34.2±4.5和82.7±5.1％。其中，中、高濃度DEX(1μM、100μM)明顯抑制IKATP(P<0.05, P<

7、0.01)。結(jié)果表明，DEX對KATP通道具有抑制作用。
　　3 DEX+YOH組：在60mV測試電壓下，灌流液中加入吡那地爾、DEX和育亨賓時，IKATP分別為10.3±0.7、6.6±1.2和6.2±1.5pA/pF。育亨賓對DEX電流抑制無影響(P＞0.05)。結(jié)果提示，DEX對KATP通道的抑制作用與α2腎上腺素能受體無關(guān)。
　　4 DEX+IDA組：在60mV測試電壓下，灌流液中加入吡那地爾、DEX、和咪唑克生時，