抑瘤寧有效成分對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖抑制作用的研究.pdf

1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文抑瘤寧有效成分對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖抑制作用的研究姓名：朱利楠申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：樊青霞;王瑞林20070526鄭州人擎2 0 0 7 屆碩E 學(xué)位論文 抑瘃寧有效成分對(duì)腫疬卸i 胞增巰抑制作用的研究前仍屬空白。本實(shí)驗(yàn)從D u e 中提取出D u c h e s i d e ，經(jīng)鑒定為D u e 活性成分之一。分別以A 、B 、C 、D 代表O r i d o n i n 、A S S 、S o l a

2、n i n e 、D u c h e s i d e 四種藥物，采用四種藥物分別單用和以A 為主要成分，與B 、c 、D 進(jìn)行二聯(lián)、三聯(lián)、四聯(lián)組合，作用于人乳腺癌M D A —M B ．2 3 1 細(xì)胞、人肺癌A 5 4 9 細(xì)胞、人肺癌N C I ．H 5 2 0 細(xì)胞、人宮頸癌H e l a 細(xì)胞，進(jìn)行體外抗腫瘤研究，探討中藥成分或單體的作用機(jī)理。并根據(jù)細(xì)胞毒性最大，藥物劑量最小的原則從多次實(shí)驗(yàn)中篩選出最佳藥物組合及最佳配伍劑量，為

3、進(jìn)一步研究抑瘤寧成分的藥理學(xué)毒性及開(kāi)發(fā)新藥提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法1 ．實(shí)驗(yàn)分組。本實(shí)驗(yàn)分為1 1 組，分別為A 、B 、C 、D 、A + B 、A + C 、A + D 、A + B + C 、A + B + D 、A + C + D 、A + B + C 十D ，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組( 未加藥組) 。2 ．采用噻唑藍(lán)( M T T ) 還原法測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組對(duì)M D A ．M B ．2 3 1 、A 5 4 9 、N C I ．H 5 2 0

4、、H e l a 細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，接種于9 6 孑L 板，培養(yǎng)2 4 h 后，將不同濃度的各組藥物分別作用于M D A ．M B ．2 3 1 、A 5 4 9 、N C I —H 5 2 0 、H e l a 細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)4 8 h 后，測(cè)定各組細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。每個(gè)濃度設(shè)6 個(gè)平行孔，重復(fù)三次。3 ．倒置顯微鏡觀察各組藥物作用于M D A ．M B ．2 3 1 細(xì)胞4 8 h 后的形態(tài)學(xué)變化。4 ．流式細(xì)胞儀檢測(cè)

5、各組藥物作用后M D A —M B ．2 3 1 細(xì)胞周期分布和凋亡率。5 ．統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用統(tǒng)計(jì)軟件S P S S l l ．0 分析，用獨(dú)立樣本的t 檢驗(yàn)，Z 2檢驗(yàn)對(duì)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，如有差異，多組問(wèn)參數(shù)兩兩比較采用q 檢驗(yàn)。以c t = 0 ．0 5為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。結(jié)果1 ．不同濃度不同藥物分組的四種藥物作用于體外培養(yǎng)的M D A —M B 一2 3 l 、A 5 4 9 、N C I —H 5 2 0 、H e l a 細(xì)胞4 8

6、 h 后，各實(shí)驗(yàn)組生長(zhǎng)抑制率結(jié)果如下：1 ．1 M D A —M B - 2 3 1 細(xì)胞：A 在單藥組抑制作用最強(qiáng)( I C s o = 4 ．7 8 9 9 ／m 1 ) ，C 次之( I C 5 0 = 1 ．1 5 m g ／m 1 ) ，B 最弱( I C 5 0 = 2 ．1 5 m g ／m 1 ) 。四藥聯(lián)合在聯(lián)合用藥組各成分劑量最小( A 2 I ．t g ／m + B 0 ．6 m g ／m l + C 0 ．4 m