大蒜素對大鼠肝星狀細(xì)胞膠原生成的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、背景:肝病治療一直是困擾醫(yī)學(xué)界的難題,近幾年,肝纖維化的研究對于慢性肝病、肝硬化的形成所擁有的重要研究價(jià)值,被醫(yī)學(xué)界所認(rèn)可,其發(fā)生的機(jī)制也得有了一定的共識。目前公認(rèn)的肝纖維化機(jī)制,是肝細(xì)胞的外基質(zhì)發(fā)生降解減少與過度的沉積所造成的。肝纖維化的研究主要圍繞膠原纖維的合成與分解,以及影響膠原合成與分解的因素,以期找到肝纖維化的早期診斷與治療的辦法。其中細(xì)胞因子介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞之間、細(xì)胞與基質(zhì)之間的相互作用所引起的肝星狀細(xì)胞激活肝纖維化過程,是該

2、研究的最關(guān)鍵部分,如果發(fā)生反復(fù)的肝損傷,可進(jìn)一步活化HSC。根據(jù)臨床與實(shí)驗(yàn)資料,脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物能更加容易地激活HSC,從而損傷肝細(xì)胞。因此,在治療的過程中使用抗氧化劑,能夠?qū)Ω螕p傷以及肝纖維化癥狀進(jìn)行減輕。在抗氧化劑中,大蒜素是非常有效的一種,憑著高度的抗氧化能力,在臨床與實(shí)驗(yàn)中得到廣泛的應(yīng)用。
　　目的:觀察大蒜素對大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC-T6)增殖、凋亡的影響,探討大蒜素抗肝纖維化的作用及其機(jī)制。
　　方法:大鼠肝星狀細(xì)

3、胞株HSC-T6生長于體積分?jǐn)?shù)為10％小牛血清及1×105IU/L的青霉素、100mg/L的鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液中,在37℃、5%CO2飽和蒸汽的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。分為HSC-T6細(xì)胞空白對照組、溶劑對照組、大蒜素藥物實(shí)驗(yàn)組。大蒜素藥物實(shí)驗(yàn)組加入不同濃度的DATS。以不加藥物而加等體積的10%小牛血清及1×105IU/L的青霉素、100mg/L的鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基為試劑對照組。溶劑對照組加入1.35μl/ml二甲基亞砜。通過MTT法

4、檢測大蒜素對大鼠肝星狀細(xì)胞的增殖的影響;通過BrdU摻入實(shí)驗(yàn)檢測大蒜素對大鼠肝星狀細(xì)胞的增殖抑制作用;通過Hoechst33342染色及流式細(xì)胞術(shù)檢測AnnexinV-FITC/PI雙染檢測大蒜素對大鼠肝星狀細(xì)胞的凋亡作用;透射電鏡下觀察大蒜素作用后大鼠肝星狀細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)的變化;Westernblot實(shí)驗(yàn)鑒定大蒜素作用后大鼠肝星狀細(xì)胞的Bcl-2、MAO、TIMP-1蛋白的影響。
　　結(jié)果:HSC-T6大蒜素DATS各濃度處理組

5、與空白對照組及溶劑對照組比較,增殖抑制率和細(xì)胞凋亡率明顯增高,有顯著性差異(P<0.05);并且DATS濃度增高時(shí),HSC-T6的抑制率、凋亡率也逐漸增強(qiáng);DATS高濃度實(shí)驗(yàn)組(濃度含量24μg/mlDATS)的增殖抑制率和細(xì)胞凋亡率明顯高于空白對照組、試劑對照組及低濃度實(shí)驗(yàn)組。大蒜素可抑制大鼠肝星狀細(xì)胞的Bcl-2、MAO、TIMP-1蛋白的生成。
　　結(jié)論:大蒜素可以抑制HSC-T6增殖,抑制其凋亡相關(guān)蛋白及膠原生成相關(guān)蛋白,