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1、目的:急性肺損傷(Acute lung injury,ALI)是急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)的基礎(chǔ)病變,是多器官功能障礙綜合征(multipie organ dysfunctionsyndrome,MODS)在肺臟的表現(xiàn),其本質(zhì)是由各種原因直接或間接損傷肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞,導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙,肺毛細(xì)血管通透性增高的血管滲漏綜合征。ALI和ARDS是性質(zhì)相同但程度
2、不同的連續(xù)病理生理過程的不同階段,ALI是ARDS的早期階段。ALI/ARDS發(fā)病急,病情兇險(xiǎn),盡管機(jī)械通氣等治療方法的綜合應(yīng)用,但至今無特效的治療方法,病死率仍高達(dá)40~60%。二烯丙基三硫(diallyl trisulfide,DATS)是大蒜提取物的主要成分。大蒜為百合科蔥屬植物生蒜(Allium satirum.L)的鱗莖,其中DATS和二烯丙基二硫化物(diallyl disulfide,DADS)在大蒜提取物中含量最高,是大
3、蒜的主要有效活性成分。河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院ICU朱桂軍博士首次從蛋白激酶、轉(zhuǎn)錄因子、炎性介質(zhì)的基因及蛋白表達(dá)多個(gè)層次系統(tǒng)研究了DATS對(duì)LPS誘導(dǎo)ALI小鼠的防治作用及其相關(guān)分子機(jī)制。研究表明,大蒜提取物能減少促炎細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β的生成,預(yù)防性應(yīng)用DATS對(duì)LPS引起的ALI具有一定的預(yù)防作用。IL-18是一種前炎癥細(xì)胞因子,可以促進(jìn)TNF-α,IL-1β,IL-8,GM-CSF的分泌,產(chǎn)生IFN-γ??梢哉J(rèn)為IL-18在
4、感染所引發(fā)的瀑布樣炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)中處于上游位置。而IL-10是一種非常重要的抗炎因子。因此,本研究用LPS復(fù)制小鼠ALI模型,觀察了大蒜提取物的主要活性成分DATS對(duì)ALI小鼠血清IL-18和IL-10濃度變化,以期為臨床積極治療ALI/ARDS提供合理的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇健康昆明小鼠90只,隨機(jī)分為5組:(1)ALI組,腹腔注射LPS 10mg/kg;(2)DATS預(yù)防組,每天腹腔注射DATS 30mg/kg一次,連
5、續(xù)注射7天后,腹腔注射LPS 10mg/kg;(3)DATS治療組,腹腔注射LPS后30min,腹腔注射DATS 30mg/kg一次;(4)DATS組,每天腹腔注射大蒜素30mg/kg一次,連續(xù)注射7天;(5)生理鹽水對(duì)照組,腹腔注射等體積生理鹽水。用HE染色(hematoxylin and eosinstain,HE stain),光鏡觀察12h點(diǎn)肺組織形態(tài)學(xué)改變。用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbe
6、nt assay,ELISA)分別測(cè)定血清中IL-18、IL-10在2h和6h含量。用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示,各組均數(shù)的比較行單因素方差分析(ANOVA),P<0.05為有顯著性差異。 結(jié)果: 1.肺組織形態(tài)學(xué)變化肺大體觀察,對(duì)照組及DATS組肺外觀均無明顯異常改變;ALI組肺體積增大,呈暗紅色,散在有大小不一的紅色斑點(diǎn),切面疏松,有淡紅色液體溢出;DATS預(yù)防組較
7、.ALI組病變明顯減輕,但DATS治療組較ALI組無明顯變化。光鏡觀察肺組織形態(tài)學(xué)改變發(fā)現(xiàn),對(duì)照組及DATS組肺組織結(jié)構(gòu)完整,肺泡間隔無水腫,肺泡腔清晰;ALI組肺泡間隔增寬,腔內(nèi)有少許出血、滲出及炎性細(xì)胞浸潤(rùn),肺間質(zhì)充血水腫,有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn);DATS預(yù)防組肺組織中炎細(xì)胞浸潤(rùn)、滲出及出血等形態(tài)學(xué)變化較ALI組明顯減輕;DATS治療組無明顯改善。 2.血清中IL-18含量變化ALI組,2h時(shí)血清中IL-18含量明顯高于對(duì)照組(
8、P<0.01),6h時(shí)IL-18含量有所降低,但仍然高于對(duì)照組(P<0.01)。DATS預(yù)防組,2h及6h血清中IL-18含量均明顯低于ALI組(P<0.01),但6h時(shí)含量明顯低于2h時(shí)(P<0.01)。DATS治療組,血清中IL-18含量較ALI組無明顯降低(P>0.05)。DATS組血清中IL-18含量和相應(yīng)的對(duì)照組相比較無明顯變化(P>0.05)。 3.血清中IL-10含量變化ALI組,2h及6h時(shí)血清中IL-10含量均
9、明顯高于對(duì)照組(P<0.01),6h時(shí)IL-10含量較2h時(shí)有所升高。DATS預(yù)防組,2h及6h時(shí)均可升高血清中IL-10含量(P<0.01),但6h時(shí)IL-10含量明顯高于2h時(shí)(P<0.05)。DATS治療組,血清中IL-10含量較ALI組無明顯升高(P>0.05)。DATS組中血清中IL-10含量和相應(yīng)的對(duì)照組相比較無明顯變化(P>0.05)。 結(jié)論 1.預(yù)防性應(yīng)用DATS可減輕LPS誘導(dǎo)的ALI小鼠肺水腫程度及肺
10、組織炎癥反應(yīng)。 2.LPS誘導(dǎo)的ALI小鼠血清中IL-18濃度明顯高于對(duì)照組,說明LPS誘導(dǎo)的ALI小鼠能夠產(chǎn)生大量的IL-18。 3.預(yù)防性應(yīng)用DATS能抑制LPS誘導(dǎo)的小鼠血清中炎性細(xì)胞因子IL-18的生成。 4.預(yù)防性應(yīng)用DATS能促進(jìn)LPS誘導(dǎo)的小鼠血清中抗炎性細(xì)胞因子IL-10的生成。 5.DATS可以通過抑制LPS誘導(dǎo)的ALI血清中促炎性細(xì)胞因子IL-18含量,促進(jìn)抗炎性細(xì)胞因子IL-10含量
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