IL-29和IL-10對(duì)脂多糖誘導(dǎo)Hela細(xì)胞炎癥因子表達(dá)作用的初步探討.pdf

1、目的：探討IL-29和IL-10單獨(dú)和聯(lián)合脂多糖刺激Hela細(xì)胞后IL-15和IL-6轉(zhuǎn)錄水平的變化,分析其激活的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
　　 方法：培養(yǎng)的Hela細(xì)胞，經(jīng)不同濃度的LPS 及IL-10（IL-29）單獨(dú)或聯(lián)合處理后，提取細(xì)胞總RNA和總蛋白，RT-PCR 分析IL-15和IL-6 轉(zhuǎn)錄水平的變化，Westernblot 分析信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路蛋白變化。
　　 結(jié)果：⑴RT-PCR 分析顯示：1ng ①～10μg LP

2、S 刺激Hela細(xì)胞12 h 后，IL-15mRNA和IL-6mRNA 水平均明顯上調(diào)（與對(duì)照組比較：P<0.01），且存在劑量依賴關(guān)系，100 ng/mL時(shí)達(dá)峰值；100 ng/mL LPS 刺激Hela細(xì)胞0～24 h，IL-15mRNA和IL-6mRNA 水平亦明顯上調(diào)（與對(duì)照組比較：P<0.01），24 h 內(nèi)存在時(shí)間依賴關(guān)系，12 h時(shí)達(dá)峰值。②單獨(dú)IL-10（10 ng/mL）作用于Hela細(xì)胞12 h 后，IL-15mRN

3、A和IL-6mRNA沒(méi)有明顯變化(與對(duì)照組比較：P>0.05)。不同濃度的IL-10(1，10，100 ng/mL)均下調(diào)100 ng/mL LPS 誘導(dǎo)的Hela細(xì)胞IL-15mRNA和IL-6mRNA的表達(dá)，且濃度越高IL-10 抑制作用越明顯。③單獨(dú)IL-29(100ng/ml)作用能顯著降低Hela細(xì)胞IL-15和IL-6 轉(zhuǎn)錄水平。IL-29和LPS 聯(lián)合作用Hela細(xì)胞后，IL-29 亦能顯著抑制LPS 誘導(dǎo)的IL-15和I

4、L-6 轉(zhuǎn)錄，并且在一定濃度范圍內(nèi)（80～240ng/ml）存在劑量依賴性（與LPS 組比較，P<0.05），IL-29 濃度越高，抑制作用越明顯。PD98059 ④ （50μM）+LPS 組和LPS 單獨(dú)作用Hela細(xì)胞組相比，IL-15mRNA和IL-6mRNA 沒(méi)有顯著性差異；LY294002（50μM）+LPS 組和LPS 單獨(dú)作用Hela細(xì)胞組相比，IL-15mRNA和IL-6mRNA 顯著下調(diào)。⑵Western blot 分

5、析顯示LPS 激活PI3K/AKT、ERK1/2和STAT1 信號(hào)通路，PD98059（50μM）抑制ERK1/2信號(hào)蛋白的激活，LY294002（50μM）抑制PI3K/AKT 信號(hào)蛋白的激活。IL-10 能下調(diào)LPS 激活的AKT的磷酸化(與LPS 組相比，P<0.05)，而對(duì)LPS 誘導(dǎo)的ERK1/2和STAT1的磷酸化沒(méi)有影響(與LPS 組相比，P>0.05)。
　　 結(jié)論：IL-10和IL-29 均能抑制LPS 誘導(dǎo)的