念珠菌的母嬰傳播及口腔念珠菌感染的檢測和防治初探.pdf

1、目的：1．蘭州市母嬰間念珠菌傳播的流行病學調查。 2．建立一種快速、簡便的檢測和鑒定念珠菌的聚合酶鏈反應（PCR）方法。 3．探索念珠菌產(chǎn)酸性與其致病性的相關關系，以及應用木糖醇抑制念珠菌產(chǎn)酸和生長的可行性。 4．探索念珠菌疫苗實驗動物模型建立的可行性，為念珠菌疫苗的研制奠定實驗基礎。 方法：1．采集產(chǎn)婦的陰道分泌物和口腔分泌物樣本，及其新生嬰兒的口腔分泌物樣本，應用CHROMagar念珠菌顯色培養(yǎng)基進行

2、培養(yǎng)、分離及鑒定，同時應用分子生物學技術對結果進行驗證鑒定。 2．收集常見口腔念珠菌臨床樣本，應用聚合酶鏈反應（PCR）技術，采用四對念珠菌引物擴增DNA產(chǎn)物，改良出能夠有效檢測常見病原念珠菌的PCR引物。 3．對分離培養(yǎng)出的四種口腔常見念珠菌進行培養(yǎng)，應用PH值檢測法檢測不同時段每種念珠菌的產(chǎn)酸力，并使用木糖醇替代培養(yǎng)基中的葡萄糖，測定OD600和PH值。 4．應用分離培養(yǎng)出的口腔常見念珠菌，制備滅活念珠菌菌液

3、，每周以固定劑量注射入實驗小鼠體內(nèi)，8周后采集小鼠血清檢測其對念珠菌生長的抑制作用，并采集小鼠臟器，觀察有無病理損害。 結果：1．產(chǎn)婦陰道念珠菌檢測陽性率為39．42％，口腔念珠菌陽性率為33．65％，其中21．15％陰道與口腔同為陽性；新生兒口腔念珠菌培養(yǎng)陽性率為4．81％；有2對母嬰同時分離出白色念珠菌，經(jīng)PCR檢測，其基因型相同。 2．應用四對引物擴增口腔常見念珠菌，依據(jù)PCR電泳圖譜及測序結果，證實改良的念珠菌P

4、CR引物較培養(yǎng)法和其他引物的檢出率和準確性高。 3．白色念珠菌、熱帶念珠菌和光滑念珠菌在培養(yǎng)一定時間后其培養(yǎng)基PH值明顯降低，熱帶念珠菌和光滑念珠菌繼續(xù)培養(yǎng)一段時間后培養(yǎng)基PH值有升高趨勢。各種念珠菌在木糖醇培養(yǎng)基中OD600值最低；白色念珠菌、熱帶念珠菌和克柔念珠菌在含有葡萄糖的培養(yǎng)基中培養(yǎng)時PH值明顯降低，在木糖醇培養(yǎng)基中PH值無明顯變化。 4．實驗組小鼠血清對念珠菌的生長有明顯的抑制作用；同時，觀察小鼠的臟器病理切

5、片也可看出，腹腔注射念珠菌滅活菌液未造成小鼠臟器組織結構損害。 結論：1．蘭州市新生兒念珠菌檢出率以及母嬰間念珠菌的傳播率較其他地區(qū)高；新生兒念珠菌感染與念珠菌的水平傳播和垂直傳播均相關。 2．ITS通用引物與念珠菌特異性引物結合的改良多重PCR檢測法，可快速、簡便、特異、敏感地檢測出念珠菌，并能同時鑒定到種，對臨床常見念珠菌的早期快速診斷和治療，有重要的臨床應用價值。 3．白色念珠菌、熱帶念珠菌、光滑念珠菌具有

6、產(chǎn)酸性。同其他念珠菌相比，白色念珠菌產(chǎn)酸更加快速，產(chǎn)酸力最強且持續(xù)時間最長。此結果與臨床上報道的白色念珠菌的感染率最高，致病性最強的結果一致，可推論出念珠菌的致病性可能與念珠菌的產(chǎn)酸性具有一定的相關性。而且，木糖醇可以抑制念珠菌的糖代謝產(chǎn)酸。同時，木糖醇不能為念珠菌生長提供營養(yǎng)來源，念珠菌的生長受到明顯的抑制。 4．誘發(fā)實驗動物機體對念珠菌產(chǎn)生主動免疫是可行的，通過實驗檢測，機體形成的抗體能有效抑制念珠菌生長。念珠菌疫苗的出現(xiàn)對