念珠菌的母嬰傳播及口腔念珠菌感染的檢測和防治初探.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:1.蘭州市母嬰間念珠菌傳播的流行病學調查。 2.建立一種快速、簡便的檢測和鑒定念珠菌的聚合酶鏈反應(PCR)方法。 3.探索念珠菌產(chǎn)酸性與其致病性的相關關系,以及應用木糖醇抑制念珠菌產(chǎn)酸和生長的可行性。 4.探索念珠菌疫苗實驗動物模型建立的可行性,為念珠菌疫苗的研制奠定實驗基礎。 方法:1.采集產(chǎn)婦的陰道分泌物和口腔分泌物樣本,及其新生嬰兒的口腔分泌物樣本,應用CHROMagar念珠菌顯色培養(yǎng)基進行

2、培養(yǎng)、分離及鑒定,同時應用分子生物學技術對結果進行驗證鑒定。 2.收集常見口腔念珠菌臨床樣本,應用聚合酶鏈反應(PCR)技術,采用四對念珠菌引物擴增DNA產(chǎn)物,改良出能夠有效檢測常見病原念珠菌的PCR引物。 3.對分離培養(yǎng)出的四種口腔常見念珠菌進行培養(yǎng),應用PH值檢測法檢測不同時段每種念珠菌的產(chǎn)酸力,并使用木糖醇替代培養(yǎng)基中的葡萄糖,測定OD600和PH值。 4.應用分離培養(yǎng)出的口腔常見念珠菌,制備滅活念珠菌菌液

3、,每周以固定劑量注射入實驗小鼠體內(nèi),8周后采集小鼠血清檢測其對念珠菌生長的抑制作用,并采集小鼠臟器,觀察有無病理損害。 結果:1.產(chǎn)婦陰道念珠菌檢測陽性率為39.42%,口腔念珠菌陽性率為33.65%,其中21.15%陰道與口腔同為陽性;新生兒口腔念珠菌培養(yǎng)陽性率為4.81%;有2對母嬰同時分離出白色念珠菌,經(jīng)PCR檢測,其基因型相同。 2.應用四對引物擴增口腔常見念珠菌,依據(jù)PCR電泳圖譜及測序結果,證實改良的念珠菌P

4、CR引物較培養(yǎng)法和其他引物的檢出率和準確性高。 3.白色念珠菌、熱帶念珠菌和光滑念珠菌在培養(yǎng)一定時間后其培養(yǎng)基PH值明顯降低,熱帶念珠菌和光滑念珠菌繼續(xù)培養(yǎng)一段時間后培養(yǎng)基PH值有升高趨勢。各種念珠菌在木糖醇培養(yǎng)基中OD600值最低;白色念珠菌、熱帶念珠菌和克柔念珠菌在含有葡萄糖的培養(yǎng)基中培養(yǎng)時PH值明顯降低,在木糖醇培養(yǎng)基中PH值無明顯變化。 4.實驗組小鼠血清對念珠菌的生長有明顯的抑制作用;同時,觀察小鼠的臟器病理切

5、片也可看出,腹腔注射念珠菌滅活菌液未造成小鼠臟器組織結構損害。 結論:1.蘭州市新生兒念珠菌檢出率以及母嬰間念珠菌的傳播率較其他地區(qū)高;新生兒念珠菌感染與念珠菌的水平傳播和垂直傳播均相關。 2.ITS通用引物與念珠菌特異性引物結合的改良多重PCR檢測法,可快速、簡便、特異、敏感地檢測出念珠菌,并能同時鑒定到種,對臨床常見念珠菌的早期快速診斷和治療,有重要的臨床應用價值。 3.白色念珠菌、熱帶念珠菌、光滑念珠菌具有

6、產(chǎn)酸性。同其他念珠菌相比,白色念珠菌產(chǎn)酸更加快速,產(chǎn)酸力最強且持續(xù)時間最長。此結果與臨床上報道的白色念珠菌的感染率最高,致病性最強的結果一致,可推論出念珠菌的致病性可能與念珠菌的產(chǎn)酸性具有一定的相關性。而且,木糖醇可以抑制念珠菌的糖代謝產(chǎn)酸。同時,木糖醇不能為念珠菌生長提供營養(yǎng)來源,念珠菌的生長受到明顯的抑制。 4.誘發(fā)實驗動物機體對念珠菌產(chǎn)生主動免疫是可行的,通過實驗檢測,機體形成的抗體能有效抑制念珠菌生長。念珠菌疫苗的出現(xiàn)對

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