高熱預(yù)處理對(duì)PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、第一部分高熱預(yù)處理對(duì)PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用 目的：探討高熱預(yù)處理(HPC)對(duì)過(guò)氧化氫(H2O2)所致大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤株(PC12)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的影響。 方法：體外培養(yǎng)PC12細(xì)胞，將細(xì)胞分組：Control組，常規(guī)培養(yǎng)作為對(duì)照；HPC組，將細(xì)胞置于42℃，5％CO2的培養(yǎng)箱中1h，恢復(fù)常規(guī)培養(yǎng)；H2O2組，H2O2作用1h誘導(dǎo)細(xì)胞損傷；(HPC+H2O2)組，細(xì)胞置于培養(yǎng)箱中42℃，1h高熱預(yù)處理后18h，

2、再以H2O2作用1h誘導(dǎo)細(xì)胞損傷。MTT法測(cè)定細(xì)胞活力，乳酸脫氫酶(LDH)法檢測(cè)細(xì)胞損傷，流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡。 結(jié)果：與Control組相比，H2O2引起PC12細(xì)胞活力下降(MTT值1.28±0.23，0.64±0.18，P＜0.01)，LDH釋放量增多(82±4，340±20，P＜0.01)，凋亡明顯；而預(yù)先行HPC，再給予H2O2作用的細(xì)胞與單純H2O2處理的細(xì)胞相比，則表現(xiàn)為MTT值升高(0.64±0.18,0.8

3、9±0.10，P＜0.05)，LDH釋放量減少(340±20，290±18，P＜0.05)，且沒(méi)有出現(xiàn)明顯凋亡。 結(jié)論：高熱預(yù)處理(HPC)對(duì)H2O2所致PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷產(chǎn)生保護(hù)作用。 第二部分熱休克蛋白70表達(dá)上調(diào)對(duì)PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷保護(hù)作用 目的：從細(xì)胞和蛋白水平，探討高熱預(yù)處理(HPC)對(duì)PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷保護(hù)作用是否由熱休克蛋白70(HSP70)表達(dá)上調(diào)所介導(dǎo)。 方法：體外培養(yǎng)

4、PC12細(xì)胞，將細(xì)胞分組：Control組，常規(guī)培養(yǎng)作為對(duì)照；HPC組，將細(xì)胞置于42℃，5％CO2的培養(yǎng)箱中1h，恢復(fù)常規(guī)培養(yǎng)至24h；H2O2組，常規(guī)培養(yǎng)18h后，H2O2作用6h誘導(dǎo)細(xì)胞損傷；(HPC+H2O2)組，細(xì)胞置于培養(yǎng)箱中42℃，1h高熱預(yù)處理后18h，再以H2O2作用6h誘導(dǎo)細(xì)胞損傷。各組細(xì)胞不同處理后24h，于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變攝像并用westernblotting方法分析胞內(nèi)HSP70含量變化。另外，獨(dú)

5、立檢測(cè)PC12細(xì)胞經(jīng)HPC后不同恢復(fù)時(shí)間胞內(nèi)HSP70含量變化，觀察HPC后胞內(nèi)HSP70含量變化的時(shí)間過(guò)程。 結(jié)果：①各組細(xì)胞不同處理后24h，與Control組細(xì)胞相比，單純H2O2處理6h的PC12細(xì)胞數(shù)目明顯減少，形態(tài)不規(guī)則，折光性差，部分細(xì)胞呈裂解狀態(tài)。而HPC18h后再行H2O2處理6h的PC12細(xì)胞則狀態(tài)明顯改善，與單純H2O2處理細(xì)胞相比，不但細(xì)胞數(shù)目較多，而且細(xì)胞形態(tài)較完整，折光性好。②在鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變

6、的同時(shí)，相同處理的細(xì)胞經(jīng)westernblotting方法分析HSP70表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)(HPC+H2O2)組細(xì)胞HSP70表達(dá)明顯上調(diào)，而單純H2O2組細(xì)胞HSP70表達(dá)量很低。③獨(dú)立檢測(cè)PC12細(xì)胞內(nèi)HSP70含量變化的時(shí)間過(guò)程發(fā)現(xiàn)，HPC后3h-6h，HSP70表達(dá)迅速上調(diào)，并維持高水平24h-42h。聯(lián)系第一部分的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，細(xì)胞在HPC18h后，經(jīng)歷H2O2氧化應(yīng)激損傷后24h，始終伴隨著HSP70的高水平表達(dá)。 結(jié)論：高