何首烏種質(zhì)資源研究.pdf

1、中藥何首烏(Radix Polvgonl Multfiori)為蓼科植物何首烏(Follopiamultiflora(Thunb.)Harald.)的干燥塊根，具有補(bǔ)肝腎、益精血、烏須發(fā)、強(qiáng)筋骨之功效，臨床應(yīng)用十分廣泛。但是，不同產(chǎn)地的何首烏在活性成分含量和抗衰老作用存在顯著差異，造成何首烏藥材質(zhì)量極不穩(wěn)定，直接影響到臨床療效；何首烏種內(nèi)變異規(guī)律不明，對何首烏種內(nèi)居群的種質(zhì)資源的鑒定和評價(jià)未曾作過深入研究；何首烏藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)過于單一，

2、未能體現(xiàn)中藥的復(fù)雜性；對于影響藥材質(zhì)量的因素未曾進(jìn)行詳盡的研究。本文采用植物分類學(xué)、植物解剖學(xué)、植物生態(tài)學(xué)、中藥成分分析和DNA分子標(biāo)記技術(shù)，比較研究何首烏的變異規(guī)律；尋找優(yōu)良的種質(zhì)資源；建立更加完善的何首烏定性與定量質(zhì)控方法，為何首烏藥材的生產(chǎn)、收購、鑒定分析提供科學(xué)依據(jù)，確保臨床用藥的安全、有效。
　　 1.根據(jù)葉的性狀指標(biāo)，采用聚類分析的方法，將10個(gè)何首烏種質(zhì)資源種群分為三個(gè)大的類群，即縉云山、井岡山、德慶、恩施、施秉、

3、峨眉山、靖西七個(gè)種源的何首烏，地理位置均分布于北緯23°～30°之間；濟(jì)源、登封種源為一類群，其地理位置位于北緯34°～35°，屬于緯度相對較高的地區(qū)；田陽種源自成一類群。呈現(xiàn)出緯度地帶性。
　　 2.通過掃描電鏡和光學(xué)顯微鏡對葉表皮和莖表皮微形態(tài)進(jìn)行觀察，葉表皮細(xì)胞外壁角質(zhì)膜紋飾為密集的條紋，但角質(zhì)條紋在氣孔周圍的排列方向、條紋的粗細(xì)、彎曲程度有明顯變化。田陽種源何首烏葉下表面葉脈處表皮細(xì)胞外表面具有角質(zhì)乳突；莖外表面的角質(zhì)條

4、紋集結(jié)扭曲呈乳突狀突起，表現(xiàn)出與其他種源何首烏的差異。
　　 在光學(xué)顯微鏡下觀察了不同產(chǎn)地何首烏葉表皮結(jié)構(gòu)特征，應(yīng)用多元回歸方法對不同產(chǎn)地何首烏的葉表皮特征與氣候因子的關(guān)系進(jìn)行了探討。發(fā)現(xiàn)上表皮有少量氣孔器分布；在下表皮，氣孔器類型為非典型不等細(xì)胞型和不規(guī)則型，有少量腺鱗分布，氣孔器密度241.7(64-573)個(gè)/mm2，氣孔指數(shù)為17.1(7.5-26.5)％，氣孔器長31.1(20-44)μm，氣孔器寬23.1(16-38

5、)μm。何首烏下表皮的氣孔密度、氣孔指數(shù)、氣孔器長、寬、氣孔極區(qū)角質(zhì)加厚存在著明顯的差異；氣孔器長、氣孔器寬以及氣孔密度均與緯度關(guān)系密切，隨緯度的升高，氣孔器長、氣孔器寬呈減小的趨勢，氣孔密度呈增加的趨勢，R2值分別為0.619、0.729、0.772，表明緯度對氣孔器的長和寬有著一個(gè)協(xié)同影響的作用。
　　 3.對何首烏藥材橫切面的觀察發(fā)現(xiàn)10個(gè)種源的何首烏藥材可分為2大類群:田陽種源何首烏自成一類群，與對照藥材存在明顯差別，主

6、要表現(xiàn)在斷面的纖維性；其他種源何首烏為一類群，與2005版藥典記載特征相符。
　　 4.采用ICP法測定了不同地區(qū)何首烏植物及其生境土壤中的15種元素(Al、B、Ba、Ca、Cu、Fe、K、Mg、Mn、Ni、P、Sr、Ti、Zn)，分析比較了各種元素在不同地區(qū)何首烏體內(nèi)和生境土壤中的分布規(guī)律及不同地區(qū)何首烏對無機(jī)元素的吸收富集能力。結(jié)果表明，不同地區(qū)何首烏和土壤中無機(jī)元素含量存在著顯著差異，德慶、井岡山、靖西三地何首烏錳元素含量

7、較高；不同地區(qū)何首烏對元素的富集系數(shù)無顯著性差異，而何首烏對不同無機(jī)元素的富集系數(shù)則有顯著差異，主要表現(xiàn)在對Ca、K、Mg、Sr的吸收富集能力較強(qiáng)。
　　 5.采用TLC方法對不同產(chǎn)地何首烏進(jìn)行薄層色譜指紋圖譜的研究。以甲醇提取活性成分葸醌類和2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷，以石油醚.乙酸乙酯.甲酸(15:5:1)、三氯甲烷-甲醇-水(6.5:2.25:0.42，冰醋酸調(diào)pH=4)兩種展開系統(tǒng)進(jìn)行薄層

8、色譜分離。掃描后以峰高進(jìn)行聚類分析，建立了何首烏的TLC指紋圖譜。
　　 6.用HPLC法測定了5種有效成分，并通過相關(guān)系數(shù)分析、逐步回歸、主成分分析法探討17個(gè)環(huán)境因子對5種有效成分的影響。研究結(jié)果表明僅結(jié)合大黃素和結(jié)合大黃素甲醚與環(huán)境因子有顯著相關(guān)性，而2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、游離大黃素、游離大黃素甲醚與環(huán)境因子無顯著相關(guān)性。最冷月均溫、積溫、有效K、Zn與結(jié)合大黃素呈極顯著相關(guān)。最冷月均

9、溫、積溫、有機(jī)質(zhì)與結(jié)合大黃素甲醚呈負(fù)顯著相關(guān)。逐步回歸顯示積溫是影響結(jié)合大黃素和結(jié)合大黃素甲醚的主要環(huán)境因素?；瘜W(xué)成分的差異主要源于何首烏適應(yīng)特定環(huán)境形成的特定基因型。對何首烏化學(xué)成分進(jìn)行主成分分析，將10個(gè)來源的何首烏劃分為四個(gè)類群，德慶和峨眉山所產(chǎn)何首烏品質(zhì)最佳。
　　 7.采用ITS測序法研究何首烏種內(nèi)DNA遺傳物質(zhì)的變異規(guī)律，測定了9個(gè)產(chǎn)地，10個(gè)居群的何首烏新鮮葉片核糖體DNA ITS區(qū)序列。得到各樣品rDNA的ITS