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1、目的:通過檢測(cè)何首烏干預(yù)前后糖尿病大鼠海馬組織MLCK、NR2B、CaMKⅡ和p-CaMKⅡ的表達(dá)以及海馬神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度,觀察海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)和大鼠認(rèn)知功能變化,探討何首烏干預(yù)對(duì)糖尿病大鼠大腦認(rèn)知功能、組織學(xué)結(jié)構(gòu)的影響及可能的機(jī)制。
方法:1.采用鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型,成功后將糖尿病大鼠隨機(jī)分成4組:模型組(n=15)、何首烏低劑量組(n=15)、何首烏高劑量組(n=15)、胰島素組(n=15);同
2、時(shí)設(shè)立對(duì)照組(n=15)。糖尿病造模后第4周至第12周,何首烏干預(yù)組灌胃何首烏(低劑量組(1g/kg/d)、高劑量組(2g/kg/d)),胰島素治療組皮下注射胰島素每次8U/kg,2次/天,同時(shí)監(jiān)測(cè)空腹血糖值。2.Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)監(jiān)測(cè)大鼠的認(rèn)知功能。3.透射電鏡觀察海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)變化。4.流式細(xì)胞儀檢測(cè)鈣離子熒光探針(Fluo-3/AM)標(biāo)記海馬神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)Ca2+變化。5.Western blot檢測(cè)大鼠海馬組織MLCK、NR
3、2B、CaMKⅡ及p-CaMKⅡ的表達(dá)。
結(jié)果:1.與糖尿病模型組同時(shí)間點(diǎn)比較,胰島素組大鼠注射胰島素后血糖顯著下降(P<0.01),何首烏干預(yù)8周后血糖顯著下降(P<0.01),高劑量組較低劑量組顯著。2.與對(duì)照組比較,糖尿病模型組大鼠逃避潛伏期時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.01),穿越次數(shù)明顯減少(P<0.01);與模型組比較,何首烏高劑量組和胰島素組逃避潛伏期明顯縮短(P<0.01),穿越次數(shù)明顯增加(P<0.01),何首烏低劑
4、量組逃避潛伏期縮短無顯著差異(P>0.05),穿越次數(shù)增加無顯著差異(P>0.05)。3.與對(duì)照組比較,糖尿病模型組神經(jīng)元細(xì)胞核形態(tài)不規(guī)則,神經(jīng)元、突觸數(shù)量明顯減少;與模型組比較,何首烏和胰島素干預(yù)后,神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)較完整,神經(jīng)元、突觸數(shù)量明顯增多,且何首烏高劑量組較低劑量組顯著。4.與對(duì)照組比較,糖尿病模型組神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度及海馬組織MLCK、NR2B的表達(dá)顯著升高(P<0.01);與模型組比較,何首烏高劑量組和胰島素組海馬
5、神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度及海馬組織MLCK、NR2B的表達(dá)顯著降低(P<0.01),何首烏低劑量組Ca2+濃度顯著降低(P<0.01),海馬組織MLCK、NR2B的表達(dá)降低無顯著差異(P>0.05)。5.與對(duì)照組比較,糖尿病模型組p-CaMKⅡ表達(dá)顯著降低(P<0.05);與糖尿病模型組比較,何首烏干預(yù)后海馬組織p-CaMKⅡ水平顯著降提高(P<0.05),且高劑量組較低劑量組顯著,胰島素組p-CaMKⅡ水平無顯著差異(P>0.05);各
6、組CaMKⅡ表達(dá)水平無顯著差異(P>0.05)。 結(jié)論:1.糖尿病大鼠海馬神經(jīng)元和突觸數(shù)量明顯減少,形態(tài)結(jié)構(gòu)異常,學(xué)習(xí)記憶能力受損,何首烏干預(yù)和胰島素治療后能改善神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu),提高學(xué)習(xí)記憶能力。2.糖尿病大鼠海馬組織MLCK、NR2B表達(dá)和神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度升高,何首烏干預(yù)和胰島素治療后MLCK、NR2B表達(dá)下調(diào)和神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度降低。3.糖尿病大鼠海馬組織p-CaMKⅡ表達(dá)降低,何首烏干預(yù)后p-CaMKⅡ表達(dá)升高,胰
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