樣本預(yù)處理對(duì)膠體金免疫層析試驗(yàn)敏感性影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:（1）尋找預(yù)處理樣品的合適的物理方法，使鼠疫F1抗原從細(xì)菌莢膜上脫落下來(lái)以增加抗原抗體的反應(yīng)。（2）比較不同化學(xué)試劑對(duì)樣品預(yù)處理的效果，篩選出其中有效一種或幾種方法。（3）對(duì)其中最有效的方法的影響因素進(jìn)行分析。（4）通過(guò)對(duì)多項(xiàng)的研究結(jié)果的分析，從而確定提高診斷鼠疫抗原膠體金標(biāo)敏感性的方法。 方法:（1）用分光光度計(jì)測(cè)定鼠疫菌濃度，建立標(biāo)準(zhǔn)的濃度曲線，得出直線回歸方程。（2）用反復(fù)凍融的方法處理鼠疫菌，用膠體金免疫層析試紙條

2、（F I—RGICA）測(cè)定最小檢出量和反應(yīng)時(shí)間。（3）微波照射處理16例樣品（A組），并設(shè)立對(duì)照組（B組），比較最小檢菌量和反應(yīng)時(shí)間，并用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。（4）用超聲波對(duì)鼠疫菌進(jìn)行預(yù)處理，膠體金標(biāo)測(cè)最小檢出量。（5）對(duì)不同化學(xué)試劑：溫和劑、變性劑、螯合劑、表面活性劑處理鼠疫菌液效果進(jìn)行比較。（6）比較不同虹吸角度對(duì)金標(biāo)檢測(cè)的影響，并用方差分析其統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果。（7）觀察不同離子強(qiáng)度對(duì)膠體金的影響。 結(jié)果:（1）分光光度計(jì)建立的標(biāo)準(zhǔn)濃

3、度曲線：方程A=0．297×1gx—2．220，7億/ml鼠疫菌的光密度A值約為0．42。（2）—70℃～20℃反復(fù)凍融，隨著凍融次數(shù)的增加，膠體金標(biāo)最小檢出量逐步上升，由5萬(wàn)/ml鼠疫菌上升到1000萬(wàn)/ml。（3）用微波照射樣品組（A組）和對(duì)照組（B組），兩組最小檢菌量沒(méi)有區(qū)別，反應(yīng)時(shí)間經(jīng)t檢驗(yàn)，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。（4）用超聲波對(duì)鼠疫菌進(jìn)行預(yù)處理，膠體金標(biāo)檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定在1萬(wàn)菌/ml。（5）對(duì)不同化學(xué)試劑預(yù)處理鼠疫菌液發(fā)現(xiàn)，表面活性劑作

4、用明顯優(yōu)于溫和劑、變性劑和鰲合劑，其中尤以非離子型化學(xué)劑NP40效果最佳，分別建立直線回歸方程，NP40組斜率K為最大。（6）用NP40預(yù)處理鼠疫菌液，觀察到0．5%～2．0%范圍的NP40，pH7．0左右，預(yù)處理15分鐘以上，能使鼠疫F1抗原溶解釋放，最小檢菌量穩(wěn)定在5000菌/ml。（7）用NP40分別組合其它化學(xué)試劑預(yù)處理鼠疫菌液后，其最小檢菌量與NP40組沒(méi)有明顯差別。（8）改變虹吸角度可使金顆粒均勻釋放，并增加檢測(cè)反應(yīng)線的顯色