缺血后處理對大鼠移植胰腺缺血再灌注損傷的保護作用及其機制的研究.pdf

1、研究一缺血后處理對大鼠移植胰腺缺血再灌注損傷和細胞凋亡的保護作用及其機制
　　摘要目的：探討缺血后處理對大鼠移植胰腺冷缺血再灌注損傷和細胞凋亡的保護作用及其機制。方法：24只糖尿病SD大鼠隨機分為缺血再灌注組（I/R組，n=6）和缺血后處理組（IPO組，n=18），IPO組又根據(jù)不同方法分為3個亞組：IPO1組（再灌注30s缺血30s1次，n=6）、IPO2組（再灌注30s/缺血30s3次，n=6）和IPO3組（再灌注30s/缺血

2、30s6次，n=6），I/R組和IPO組均行胰腺移植，24只SD大鼠為供體；6只SD大鼠為假手術組（Sham組，n=6）；檢測各組再灌注前、后血糖；再灌注后2h血清中TNF-α和NO的含量、移植胰組織中SOD、MPO和MDA量；TUNEL法觀察移植胰組織細胞凋亡情況，WesternBlot檢測移植胰組織Bax和Bcl-2蛋白表達。結果：1.再灌注后IPO組相對于I/R組血糖低（P<0.05,P<0.01,P<0.05）；IPO2組較IP

3、O1組和IPO3組血糖低（P<0.05,P<0.05）；2.再灌注后IPO組較I/R組血清中TNF-α含量低（P<0.01,P<0.01,P<0.01）、NO含量高（P<0.01,P<0.01,P<0.01）；IPO2組血清中TNF-α相對于IPO1組和IPO3組低（P<0.05,P<0.05）、NO含量相對于IPO1組和IPO3組高（P<0.05,P<0.05）。3.再灌注后IPO組較I/R組移植胰組織中SOD含量高（P<0.01,P

4、<0.01,P<0.01）；，MDA和MPO含量低（P<0.01,P<0.01,P<0.01），IPO2組相對于IPO1組和IPO3組SOD含量高（P<0.05,P<0.05）、MDA和MPO含量低（P<0.05,P<0.05）。4.再灌注后IPO組較I/R組移植胰組織中AI值低（P<0.01,P<0.01,P<0.01），IPO2組相對于IPO1組和IPO3組AI值低（P<0.05,P<0.05）；5.I/R組胰組織Bax蛋白高表達，

5、Bcl-2蛋白低表達，IPO各組再灌注后移植胰組織Bax蛋白低表達，Bcl-2蛋白高表達，而IPC2組Bcl-2蛋白表達最高Bax蛋白表達最低。結論：1.缺血后處理對大鼠移植胰腺的缺血再灌注損傷具有保護作用，機制可能是提高SOD活性、增加內(nèi)源性NO合成、下調(diào)TNF-α和減少PMNs粘附與聚集。2.缺血后處理可以減少移植胰腺缺血再灌注后的細胞凋亡，機制可能是減少氧自由基、上調(diào)Bcl-2蛋白和下調(diào)Bax蛋白。3.再灌注30s/缺血30s循環(huán)

6、3次是最佳的大鼠移植胰缺血后處理誘導辦法。
　　研究二IPO,IPC,IPC-IPO對胰腺冷缺血再灌注損傷和細胞凋亡保護作用的對比研究
　　摘要目的：對比研究缺血后處理(IPO)與缺血預處理(IPC)對胰腺缺血再灌注損傷和細胞凋亡的保護作用；并分析缺血后處理與缺血預處理聯(lián)合應用(IPC-IPO)是否能更為有效的減輕胰腺冷熱缺血再灌注損傷。方法：24只糖尿病大鼠隨機分為4組：I/R組：單純2小時冷缺血后再灌注，無其它干預；IP

7、C組：在冷缺血開始前，給予供體2個循環(huán)的“5分鐘缺血-5分鐘再灌注”的缺血預處理；IPO組：結束冷缺血后，在開始長時間灌注的起始階段，給予受體3個循環(huán)的“30秒灌注-30秒再缺血”缺血后處理；IPC-IPO組：在冷缺血開始前，供體給予2個循環(huán)的“5分鐘缺血-5分鐘再灌注”缺血預處理，并且在結束冷缺血后，在開始長時間灌注的起始階段，給予3個循環(huán)的“30秒灌注-30秒再缺血”缺血后處理。6只SD大鼠為假手術組（Sham組，n=6）；檢測各組

8、再灌注前、后血糖；再灌注后2h血清中TNF-α和NO的含量、移植胰組織中SOD、MPO和MDA量；TUNEL法觀察移植胰組織細胞凋亡情況，WesternBlot檢測移植胰組織Bax和Bcl-2蛋白表達情況。結果：1.干預組(IPC組、IPO組、IPC-IPO組)的血糖水平明顯低于I/R組（P<0.01,P<0.01,P<0.01）；IPC組與IPO組的血糖水平相當(P>0.05)，IPC-IPO組與IPC組、IPO組相比，血糖水平也無明

9、顯差異(P>0.05，P>0.05)；2.再灌注后干預組(IPC組、IPO組、IPC-IPO組)較I/R組血清中TNF-α含量低（P<0.01,P<0.01,P<0.01）、NO含量高（P<0.01,P<0.01,P<0.01）；IPC組與IPO組的TNF-α及NO水平相當(P>0.05)，IPC-IPO組與IPC組、IPO組相比，TNF-α及NO水平也無明顯差異(P>0.05)；3.再灌注后干預組(IPC組、IPO組、IPC-IPO組

10、)較I/R組血清中SOD含量高（P<0.01,P<0.01,P<0.01）、MDA和MPO含量低（P<0.01,P<0.01,P<0.01）；IPC組與IPO組的SOD、MDA和MPO水平相當(P>0.05)，IPC-IPO組與IPC組、IPO組相比，SOD、MDA和MPO水平也無明顯差異(P>0.05)；4.再灌注后干預組(IPC組、IPO組、IPC-IPO組)的移植胰組織中AI值明顯低于I/R組（P<0.01,P<0.01,P<0.

11、01）；IPC組與IPO組的移植胰組織中AI值相當(P>0.05)，IPC-IPO組與IPC組、IPO組相比，移植胰組織中AI值也無明顯差異(P>0.05)；5.I/R組胰組織Bax蛋白高表達，Bcl-2蛋白低表達，干預組(IPC組、IPO組、IPC-IPO組)再灌注后移植胰組織Bax蛋白低表達，Bcl-2蛋白高表達。結論：1.IPO和IPC對胰腺的冷缺血再灌注損傷及細胞凋亡都具有保護作用，且兩者的保護作用無顯著差異。2.IPO與IPC

12、都可通過抑制中性粒細胞的聚集，減少炎性細胞因子TNF-α的釋放，減少超氧化物歧化酶失活，以清除氧自由基，上調(diào)抑凋亡基因Bcl-2的表達，下調(diào)促凋亡基因Bax的表達來發(fā)揮保護作用。且各種保護機制在IPO與IPC發(fā)揮的作用相當。3.IPC與IPO聯(lián)合應用對大鼠胰腺冷缺血再灌注損傷和細胞凋亡的保護作用無疊加效應，IPC-IPO的保護作用與單獨IPC或IPO相比無明顯增強。
　　研究三大鼠無創(chuàng)傷雙后肢缺血后處理對移植胰腺缺血再灌注損傷的遠

13、隔保護作用
　　摘要目的：探討大鼠無創(chuàng)傷雙后肢缺血后處理對移植胰腺缺血再灌注損傷的影響及機制。方法：6只SD大鼠為假手術組（Sham組，n=6）；12只糖尿病SD大鼠隨機分為缺血再灌注組（I/R組，n=6）；無創(chuàng)傷雙后肢缺血后處理（RIPO組，n=6）。檢測各組再灌注前、后血糖，再灌注后2h血清中TNF-ɑ和NO，胰腺組織中MPO和MDA含量，并應用TUNEL檢測移植胰凋亡細胞。結果：1.再灌注后I/R組相對于RIPO組血糖高（P

14、<0.01）、血清中TNF-ɑ（P<0.01）、胰腺組織中MPO（P<0.01）和MDA（P<0.01）含量高，SOD、NO含量低（P<0.01）2.再灌注后I/R組相對于RIPO組胰腺組織凋亡指數(shù)高（P<0.01）。結論：無創(chuàng)傷雙后肢缺血后處理對大鼠移植胰的缺血再灌注損傷具有保護作用，機制可能與可通過抑制中性粒細胞的聚集，減少炎性細胞因子TNF-α的釋放，減少超氧化物歧化酶失活，從而清除氧自由基等有關。
　　研究四缺血后處理對大

15、鼠胰腺移植受體小腸腸粘膜屏障的影響
　　摘要目的：探討缺血后處理對大鼠胰腺移植受體腸粘膜屏障的影響及機制。方法：12只正常大鼠為對照組，糖尿病大鼠大鼠隨機分為缺血再灌注組（I/R組，n=12），缺血后處理組（IPO組，n=12），I/R組和IPO組大鼠均接受胰腺移植，再灌注后5d檢測小腸通透性和吸收功能，檢測血清內(nèi)毒素、TNF-α、NO和SOD，取受體回腸粘膜組織檢測小腸濕/干比、微絨毛高度及寬度、MDA含量及MPO活性，同時取腸

16、系膜淋巴結、肝及脾組織進行細菌培養(yǎng)，觀察細菌移位情況。結果：再灌注后IPO組血清TNF-α含量（P<0.01）、內(nèi)毒素含量（P<0.01）、MDA含量（P<0.01）、MPO活性（P<0.01）、小腸濕/干比（P<0.01）、小腸通透性（P<0.01）、細菌易位率（P<0.01）和小腸粘膜損傷程度均低于I/R組；血清NO和SOD含量、小腸吸收功能均高于I/R組(P<0.01)。結論：缺血后處理可保護胰腺移植大鼠小腸腸粘膜屏障，降低細菌移