缺血后處理對(duì)大鼠肺缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:肺缺血-再灌注損傷( Lung Ischemia Reperfusion Injury, LIRI)在很多臨床情況下都可能發(fā)生,例如體外循環(huán)手術(shù)、肺移植、肺切除術(shù)后、肺動(dòng)脈血栓摘除術(shù)后等,迄今為止,肺缺血-再灌注損傷仍然是胸心外科醫(yī)生面臨的嚴(yán)峻挑戰(zhàn),特別是在肺移植手術(shù)后最為多見。缺血-再灌注導(dǎo)致的肺損傷的特點(diǎn)是非特異性的肺泡損傷、肺水腫和低氧血癥。盡管通過改進(jìn)肺保存方法、提高手術(shù)技術(shù)以及加強(qiáng)圍手術(shù)期的監(jiān)護(hù)使肺移植的成功率有所提高,

2、但是缺血-再灌注導(dǎo)致的肺損傷在肺移植手術(shù)后仍有較高的發(fā)病率和致死率,所以更好的了解肺缺血-再灌注損傷的機(jī)理,研究更有效的方法來(lái)減輕肺缺血-再灌注損傷具有非常重要的臨床意義。缺血后處理(Ischemic Postconditioning, I PostC)是一種在再灌注初期間斷預(yù)灌注的新方法,在心肌和肝臟中已經(jīng)證明可以減輕缺血-再灌注損傷。本實(shí)驗(yàn)建立大鼠在體肺缺血-再灌注模型,應(yīng)用后處理干預(yù),驗(yàn)證后處理對(duì)肺缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用,并通

3、過檢測(cè)肺組織中炎性細(xì)胞因子 TNF-α及 IL-1β的水平初步探討其保護(hù)作用的機(jī)制,為臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
　　材料和方法:取健康雄性SD大鼠80只,戊巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔內(nèi)注射麻醉,氣管切開后氣管插管連接小動(dòng)物呼吸機(jī)控制呼吸,呼吸頻率60次/min,吸呼比為1:1.5,工作壓力(即潮氣量):0.02MPa。經(jīng)左胸第五肋間進(jìn)入胸腔,游離左側(cè)肺門,過阻斷帶,末端套橡皮膠管形成活結(jié)備阻斷用。手術(shù)操作前經(jīng)陰莖背靜脈注射肝素鈉

4、100U/kg以維持肝素化,在再灌注期間,每隔1h由皮下注射生理鹽水0.5ml以補(bǔ)充水分的丟失。
　　將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分成5組(n=8):
　?、偌偈中g(shù)組(C組,單純開胸60min,不阻斷肺門);
　?、谌毖?再灌注30min組(RI30組,肺門阻斷30min后再灌注30min);
　?、廴毖?再灌注120min組(RI120組,肺門阻斷30min后再灌注120min);
　?、芎筇幚?0min組(P30組,

5、在缺血30min后,短暫再灌注30s,缺血30s,反復(fù)5次,然后全面恢復(fù)灌注30min);
　?、莺筇幚?20min組(P120組,在缺血30min后,短暫再灌注30s,缺血30s,反復(fù)5次,然后全面恢復(fù)再灌注120min)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)束后放血處死大鼠,取新鮮左肺組織用4％多聚甲醛固定,用免疫組化法測(cè)定肺組織中TNF-α及IL-1β的表達(dá)水平;光鏡下HE染色觀察病理形態(tài)學(xué)改變。
　　另將40只健康雄性SD大鼠按上述方

6、法隨機(jī)分成5組,測(cè)定125I標(biāo)記牛血清白蛋白(BSA)漏出量,以此來(lái)反映肺毛細(xì)血管通透性。
　　結(jié)果:
　　(1)125I標(biāo)記牛血清白蛋白(BSA)漏出量變化:IR組與C組相比較,肺組織經(jīng)過缺血再灌注后肺125I標(biāo)記牛血清白蛋白(BSA)漏出量明顯升高(p<0.05),P組與IR組比較,經(jīng)后處理后肺125I標(biāo)記牛血清白蛋白(BSA)漏出量較相應(yīng)時(shí)段的再灌注組明顯減輕(p<0.01)。
　　(2)肺TNF-α表達(dá)水平的變

7、化:以胞漿出現(xiàn)棕黃色為陽(yáng)性染色,肺組織經(jīng)缺血再灌注后,IR組與C組相比,TNF-α的表達(dá)水平明顯升高(P<0.01),且隨著時(shí)間的推移有上升趨勢(shì);P組與相應(yīng)時(shí)段的IR組相比,表達(dá)水平明顯降低(P<0.01)。
　　(3)肺 IL-1β表達(dá)水平的變化:以胞漿出現(xiàn)棕黃色為陽(yáng)性染色,肺組織經(jīng)/。缺血再灌注后,IR組與C組相比,IL-1β的表達(dá)水平明顯升高(P<0.01),且隨著時(shí)間的推移有上升趨勢(shì);P組與相應(yīng)時(shí)段的IR組相比,表達(dá)水平明

8、顯降低(P<0.01)。
　　(4)肺組織病理變化:C組:肺組織肺泡壁薄,結(jié)構(gòu)清晰,近似正常肺組織; IR組:肺泡間隔炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、水腫,肺泡腔內(nèi)炎性細(xì)胞及液體滲出,肺泡結(jié)構(gòu)模糊,以上改變隨時(shí)間延長(zhǎng)而加重;P組較之相應(yīng)時(shí)段的IR組,上述變化均明顯減輕。
　　結(jié)論:(1) I postC可以抑制再灌注肺組織中致炎因子TNF-α及IL-1β的表達(dá);
　　(2) I postC能減輕LIRI導(dǎo)致的肺毛細(xì)血管通透性增高,可以減