細胞紅蛋白在缺氧神經(jīng)元中的表達.pdf

1、背景及目的：
　　細胞紅蛋白（Cygb）是與肌紅蛋白（Mb），血紅蛋白（Hb），腦紅蛋白（Ngb）屬于同一家族的第四種攜氧球蛋白，具有攜氧、貯氧、氧感受器、清道夫的功能。體內(nèi)實驗證明 Cygb在腦特定區(qū)域神經(jīng)細胞的細胞質(zhì)和細胞核都有分布，且在缺氧情況下表達上調(diào)，可增加腦組織對缺氧的耐受能力，抵抗氧化應激所致?lián)p傷。新生兒缺氧缺血性腦損傷（Hypoxic-Ischemic Brain Damage，HIBD）是一種由圍生期各種缺氧、缺

2、血所致的發(fā)病率、致殘率高的腦部疾病。Cygb的發(fā)現(xiàn)為 HIBD的腦保護作用研究提供了新的線索。本研究探在Cygb在體外培養(yǎng)的胎鼠皮質(zhì)神經(jīng)元缺氧后24小時內(nèi)的表達變化規(guī)律，為研究細胞紅蛋白在缺氧應激神經(jīng)細胞中的調(diào)節(jié)通路提供實驗基礎，從而進一步為缺氧缺血性腦病中的治療奠定基礎。
　　材料和方法：
　　1.用含2％L-GLUTAMINE、2%B27神經(jīng)營養(yǎng)因子、96%NEUROBASAL、100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素

3、的NEUROBASAL培養(yǎng)基培養(yǎng)孕18天SD胎鼠大腦皮層神經(jīng)元，培育至第六天時培養(yǎng)用神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）免疫組織化學方法神經(jīng)細胞進行純度鑒定。
　　2.細胞缺氧：將純度達標的神經(jīng)細胞隨機分為4組，其中1組作為正常組（0小時），其余3組分別缺氧8小時，16小時，24小時，缺氧后用測氧儀監(jiān)測氣體的氧濃度，氧氣濃度在0-0.9%之間方可進行下一步實驗。
　　3.用細胞增殖與活性檢測試劑盒（CCK-8）檢測各組神經(jīng)細胞的生

4、存率。
　　4.用實時熒光定量 PCR技術(shù)（Real-timePCR）檢測細胞紅蛋白在對照組（0小時）及缺氧組（8小時，16小時，24小時）核酸的表達情況。
　　5.用蛋白印跡法（Westernblot）檢測細胞紅蛋白在對照組（0小時）及缺氧組（8小時，16小時，24小時）蛋白的表達情況。
　　6.數(shù)據(jù)統(tǒng)計：多組計量資料采用單因素方差分析，兩兩比較采用 LSD檢驗。P　　結(jié)果：

5、r>　　1.神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）免疫組織化學方法鑒定神經(jīng)元純度大于99%；
　　2.隨著缺氧時間的延長，各組神經(jīng)元死亡率目逐漸增高，但絕大部分神經(jīng)元仍存活，有足夠的神經(jīng)細胞數(shù)目能進行下一步實驗；
　　3.細胞紅蛋白核酸及蛋白的表達隨缺氧時間增長而遞增，且每組之間差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
　　結(jié)論：
　　在體外培養(yǎng)的神經(jīng)元細胞中，缺氧可以促進細胞紅蛋白的表達，提示細胞紅蛋白在缺氧性神經(jīng)損傷中可能