重組人角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2對(duì)燙傷創(chuàng)面愈合的影響及其細(xì)胞調(diào)控機(jī)制.pdf

1、角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2(Keratinocyte growth factor-2,KGF-2)又稱成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-10（Fibroblast Growth Factor-10，F(xiàn)GF-10），是成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子家族中的新成員，能特異性促進(jìn)上皮細(xì)胞增殖、分化和移行。重組人KGF-2（rhKGF-2）是以大腸桿菌為載體，優(yōu)化密碼子后合成1類基因工程新藥。本課題研究rhKGF-2對(duì)大鼠深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面愈合的影響，同時(shí)探討細(xì)胞調(diào)控機(jī)制。

2、 建立大鼠深Ⅱ度燙傷模型，每天局部給藥1次，連續(xù)15d，每4d測(cè)量傷口面積并計(jì)算愈合率，第16天觀察新生表皮厚度、移行距離及面積。rhKGF-2 5、15、45μg/傷口均能不同程度提高傷口愈合率及增加新生表皮的厚度、移行距離和移行面積（P<0.01）。皮膚標(biāo)本角蛋白免疫組化實(shí)驗(yàn)顯示rhKGF-2治療后新生表皮的角質(zhì)層厚度增加，從形態(tài)上更直觀證明rhKGF-2能顯著促進(jìn)新生表皮的生長(zhǎng)。 通過體外培養(yǎng)永生化人角質(zhì)細(xì)胞HaCaT研

3、究rhKGF-2對(duì)細(xì)胞增殖的影響。rhKGF-2（1～100ng/ml）均顯著促進(jìn)HaCaT細(xì)胞增殖，且呈濃度依賴性，HaCaT細(xì)胞增殖率與rhKGF-2的濃度對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系（R2=0．965，P<0．05）。rhKGF-2（1～100ng/ml）刺激下HaCaT細(xì)胞集落形成率也增加（P<0．05），形成的集落較大，集落內(nèi)細(xì)胞呈明顯的增殖形態(tài)，細(xì)胞多呈星狀，胞內(nèi)染色質(zhì)豐富。而低濃度rhKGF-2（1ng/ml、10ng/ml）對(duì)成纖維細(xì)

4、胞NIH3T3細(xì)胞無(wú)明顯影響。提示rhKGF-2是表皮細(xì)胞特異性分裂原，一定劑量的rhKGF-2不易產(chǎn)生病理性疤痕。 此外，rhKGF-2（100ng/ml）刺激后進(jìn)入S期的HaCaT細(xì)胞比例顯著增加，G0G1期比例降低（P<0.01）。rhKGF-2能激活ERK磷酸化，顯著促進(jìn)活化的ERK進(jìn)入細(xì)胞核。提示rhKGF-2可能激活ERK信號(hào)通路，調(diào)控細(xì)胞周期，從而促進(jìn)HaCaT細(xì)胞增殖。 通過建立HaCaT細(xì)胞刮傷模型進(jìn)一